新規のヒトTh1型サイトカイン特異的転写因子、Txkの機能解析

新型人Th1型细胞因子特异性转录因子Txk的功能分析

基本信息

批准号：
13037033
负责人：
鈴木登
金额：
$ 2.62万
依托单位：
St. Marianna University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Th1細胞分化とTxk発現の関連を知る目的で各種サイトカインがTxk発現に与える影響を調べた。CD4+T細胞にIL-12,IFN-γ,IL-18を加わえるとTxkの発現は増加した。IL-4,IL-13を添加するとTxk発現は減少した。Txkプロモータールシフェラーゼプラスミドを作成し、その発現調節機構を解析した。Txkプロモーター領域にはSTAT-4やSTAT-6の結合領域が複数存在しそれらが上記のサイトカイン刺激に反応して、Txk遺伝子転写の調節に働くことが示された。即ちTxkはヘルパーT前駆細胞がTh1細胞に分化するのに伴い発現され、Th1/Th2型細胞の分化誘導はTxk遺伝子転写、蛋白発現と並行した。IFN-γプロモーターの欠失変異体を用いて、Txkの作用部位を決定しゲルシフト法を用いてTxkが転写因子として作用するIFN-γ遺伝子プロモーターの結合モチーフを同定した。TxkはIFN-γプロモーター-40付近を認識し結合した。Txkの結合モチーフはサル、ウシ、ヒツジ、ラットなどのIFN-γプロモーター領域にも認められた。Th2疾患ではTxk発現が低下していた。Th1疾患においてTxkは発現しておりIFN-γの発現と並行していた。即ちTxk発現と各種病態との関連が示唆された。Txk発現を調節することで多くの疾患の免疫異常と症状を改善できる可能性がある。txk発現ベクターを投与したマウスではコントロールベクター投与マウスに比べて脾細胞によるIFN-γ産生は明らかに亢進した。この成績はtxk遺伝子投与が、in vivoにおいてもTh1細胞を誘導できることを示し、txk遺伝子治療の可能性を示している。

为了了解Th1细胞分化与Txk表达之间的关系，我们研究了各种细胞因子对Txk表达的影响。当向 CD4+ T 细胞添加 IL-12、IFN-γ 和 IL-18 时，Txk 表达增加。添加 IL-4 和 IL-13 降低了 Txk 表达。我们构建了Txk启动子荧光素酶质粒并分析了其表达调控机制。研究表明，Txk启动子区域存在多个STAT-4和STAT-6结合区域，这些区域响应上述细胞因子刺激而发挥调节Txk基因转录的作用。也就是说，Txk随着T辅助祖细胞分化为Th1细胞而表达，并且Th1/Th2型细胞分化的诱导与Txk基因转录和蛋白质表达平行。使用 IFN-γ 启动子的缺失突变体，我们确定了 Txk 的作用位点，并使用凝胶位移方法鉴定了 IFN-γ 基因启动子中的结合基序，其中 Txk 作为转录因子。 Txk 识别并结合到 IFN-γ 启动子-40 附近。 Txk 结合基序也在猴、牛、羊和大鼠的 IFN-γ 启动子区域中发现。 Th2 疾病中 Txk 表达降低。 Txk 在 Th1 疾病中表达，与 IFN-γ 的表达平行。换句话说，提出了Txk表达与各种病理状况之间的关系。调节 Txk 表达可以改善免疫异常和许多疾病的症状。与施用对照载体的小鼠相比，施用txk表达载体的小鼠中，脾细胞产生的IFN-γ明显增强。这些结果表明，即使在体内，txk基因施用也可以诱导Th1细胞，表明txk基因治疗的可能性。