神経シナプスにおけるエンドサイトーシスの変化を指標とした神経変性疾患の解析

以神经突触内吞作用变化为指标分析神经退行性疾病

基本信息

批准号：
13035032
负责人：
竹居孝二
金额：
$ 2.94万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13035032/
关键词：
脳神経 Klotho エンドサイトーシス脈絡叢老化

项目摘要

1.老化モデルマウスを用いた解析老化脳における神経シナプスの変化を調べるため、老化モデルマウスであるKlotho変異マウス海馬シナプスにおけるタンパク発現を精査した。蛍光免疫染色法および蛍光強度の定量的測定では、シナプス小胞のマーカーであるSynaptophysinの発現が海馬CA3領域において軽度減少していた。次にシナプスエンドサイトーシス機能蛋白(Clathrin、AP2、Dynamin1、Amphiphysin1など)の発現と局在をそれぞれウエスタンブロッティング、蛍光免疫染色法により調べた。Klotho変異マウス海馬ではDynamin1の発現がわずかにの減少していたが、他のタンパクについては変化はみられなかった。2.Klothoタンパクの局在Klotho変異マウス脳における上記の変化とKlothoタンパクの関連を明らかにする目的で、Klothoタンパクの局在を蛍光免疫染色法により調べた。既にKlotho mRNAは脈絡叢上皮に局在することが報告されているが、Klothoタンパクも脈絡叢に特異的に発現していた。さらに共焦点顕微鏡観察、金コロイドを用いた凍結免疫電顕法により、Klothoタンパクが脈絡叢上衣細胞のapical側(脳室側)に選択的に局在することが明らかになった。脈絡叢は脳脊髄液の産生、調節に機能することから、Klotho変異マウス脳にみられた上記の比較的軽度な変化は、脳脊髄液産生、調節の変化を介した二次的な変化である可能性が示唆された。

1.使用衰老模型小鼠进行分析为了研究衰老大脑中神经元突触的变化，我们研究了Klotho突变小鼠（即衰老模型小鼠）的海马突触中的蛋白质表达。荧光免疫染色和荧光强度定量测量表明，海马 CA3 区突触泡标记物突触素的表达略有下降。接下来，分别通过Western blotting和荧光免疫染色研究突触内吞功能蛋白（Clathrin、AP2、Dynamin1、Amphiphysin1等）的表达和定位。 Klotho突变小鼠海马体中Dynamin1的表达略有下降，但其他蛋白没有观察到变化。 2.Klotho蛋白的定位为了阐明Klotho蛋白与Klotho突变小鼠大脑中上述变化的关系，通过荧光免疫染色研究了Klotho蛋白的定位。已有报道Klotho mRNA定位于脉络丛上皮，Klotho蛋白也在脉络丛中特异表达。此外，使用胶体金的共聚焦显微镜和冷冻免疫电子显微镜显示，Klotho蛋白选择性地定位于脉络丛室管膜细胞的心尖侧（心室侧）。由于脉络丛在脑脊液的产生和调节中发挥作用，因此在Klotho突变小鼠的大脑中观察到的相对轻微的变化可能是由脑脊液产生和调节的变化介导的继发性变化。