マウスTL抗原を標的とした免疫療法モデルの開発

小鼠TL抗原免疫治疗模型的开发

基本信息

批准号：
12217170
负责人：
高橋利忠
金额：
$ 42.37万
依托单位：
Aichi Cancer Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)組み換え技術を用いて、TL抗原特異的エフェクターT細胞株を樹立すべく、TL特異的細胞傷害性T細胞(CTL)クローンからT細胞レセプター(TCR)遺伝子を、また抗TL抗体産生ハイブリドーマから抗体遺伝子の単離を行った。単離したTCRおよび抗体遺伝子が単鎖構造を取るような組み換え遺伝子を構築し、さらにシグナル伝達分子であるCD3ζ遺伝子の細胞内ドメインとタンデムに結合させたキメラ遺伝子を作成した。このうち、抗体キメラ分子については、活性化T細胞表面に発現できることを確認した。(2)C3HとB6マウスに化学発がん剤NBUを経口投与すると、C3HにおけるTL陽性腫瘍の発症時期がB6に比べて遅延した(統計学的には有為差は無い)。また、C3Hが同系のTL遺伝子導入マウス由来のTL陽性皮膚を拒絶するのに対し、B6では拒絶が見られなかった。In vivo抗TL活性の異なるC3HとB6を解析し、H-2K^b分子の発現により、TL特異的CTLの不活化が起こることを示唆した。また、TLテトラマー陽性細胞率および血清中の抗TL抗体活性はB6よりC3Hにおいて高く、in vivoの抗TL活性との相関が見られたが、(B6×C3H)F_1マウスをrecipientとして用いた各個体レベルでの検索では、これらin vitroの成績とin vivo抗TL活性とには明らかな一致が見られなかった。

（1）利用重组技术，为了建立TL抗原特异性效应T细胞系，我们从TL特异性细胞毒性T细胞（CTL）克隆中获得了T细胞受体（TCR）基因和抗TL抗体-从中分离出产生抗体的基因。我们构建了一个重组基因，其中分离的TCR和抗体基因具有单链结构，并创建了一个与信号转导分子CD3ze基因的胞内结构域串联连接的嵌合基因。其中，证实了抗体嵌合分子可以在活化的T细胞表面表达。 (2)C3H和B6小鼠口服化学致癌剂NBU，与B6小鼠相比，C3H小鼠TL阳性肿瘤的发生延迟(无统计学差异)。此外，虽然C3H排斥来自同基因TL转基因小鼠的TL阳性皮肤，但在B6中没有观察到排斥。我们分析了 C3H 和 B6，它们具有不同的体内抗 TL 活性，并表明 H-2K^b 分子的表达导致 TL 特异性 CTL 失活。此外，C3H中的TL四聚体阳性细胞率和血清中的抗TL抗体活性高于B6，并且观察到与体内抗TL活性的相关性，当在个体水平上进行搜索时，没有明确的一致性。在这些体外结果和体内抗 TL 活性之间发现。