細胞内鉄濃度を制御する転写因子の鉄センシング機構と転写活性化機構

控制细胞内铁浓度的转录因子的铁感应和转录激活机制

基本信息

批准号：
12147204
负责人：
岩井裕子
金额：
$ 20.54万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

出芽酵母において、鉄代謝機構の制御に関わる遺伝子群の発現を鉄の必要量に応じて制御する転写因子Aft1の細胞内鉄濃度のセンシング機構の解明を目指して研究を遂行し,以下の結果を得た。1.鉄によるAft1の核外移行制御機構の解析Aft1の核内移行担体であるPse1の温度感受性株を用いた核外移行アッセイを行うことにより,Aft1の鉄による転写活性化能の制御に核外輸送制御が重要であることが判明した。これと一致して、前年度にAft1の核外輸送担体であることが明らかになったMsn5とAft1が鉄存在下では結合するが,鉄欠乏状態では結合しないという観察結果を得た。また,両者の相互作用に必要なAft1配列内の領域の同定がほど完了したので,この領域でのMsn5との結合に対する鉄の影響を観察中である。2.Aft1の活性に影響を与える新たな因子の同定とその機能の解析鉄によるAft1の活性制御はMsn5との相互作用の制御以外の制御も存在することが明らかになり,その制御に関与する因子の同定を行った。同定された因子のなかにはその配列の相同性より推察される機能がAft1に鉄を運搬するあるいはAft1への鉄の結合に利用されると考えられるような遺伝子が存在しており,その機能の解析を行っている。3.Aft1の鉄の結合能の解析Aft1の大量精製は困難であったが,Aft1に高い相同性を示し,Aft1と同じ核移行担体・核外移行担体と相互作用すると考えられるAft2の大腸菌での大量精製に成功し,結合様式を分光学的に解析した結果,鉄の結合を示唆するようなシグナルが観察されたが,非常に微弱なシグナルであった。この結果より,精製されたAft2蛋白質はアポ型が大半であると考えられたため,より多くのホロ型が得られる条件の検討中である。

在胚芽酵母中，进行了研究，以阐明转录因子Aft1的细胞内铁浓度的感应机制，该基因基因基因的表达与控制铁代谢机制有关的基因组的表达，并根据以下量和以下量结果我得到了。 1。使用PSE1的核转型测定法（是核转型CO所有者）对铁对铁的外部过渡控制机制的分析是对IT中铁的过渡激活能力的核控制事实证明，外国运输控制很重要。与此相一致的是，在上一个财政年度揭示的MSN5和AFT1是核 - 核出口的，它与铁的存在结合，但没有结合铁缺乏症。此外，由于已经完成了两者之间相互作用所需的AFT1序列中的区域，因此在与MSN5的键上观察到铁对该区域的影响。 2。通过对功能的分析来影响AFT 1的活性和活动的活性控制的新因素的鉴定表明，除了控制与MSN5的相互作用以外，还有其他对照，并且它参与控制因素。一些确定的因素具有被认为是从阵列的同源物推断为铁或使用铁的基因，并分析了该功能。 3。很难批量地完善对过去1的铁结合能力的分析，但是很难表明Aft1中的同源性很高，并且被认为与相同的核过渡载体和外部过渡载体相互作用成功质量纯化和分析结合样式的结果，该信号表明了铁键，但这是一个非常弱的信号。结果，纯化的AFT2蛋白被认为主要是APO类型，因此正在考虑更多的Holo类型。