抗体CDRのアミノ酸配列と抗原特異性の相関関係の解析

抗体CDR氨基酸序列与抗原特异性的相关性分析

基本信息

批准号：
09261237
负责人：
黒澤良和
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は抗体CDRのアミノ酸配列と抗原特異性の相関関係を解析する目的で進められている。平成9年度は次の2点の成果を得た。ステロイドには様々な誘導体が存在する。そこで抗ステロイド抗体を用いて抗原特異性の変換実験を行った。抗17α-hydroxyprogesterone(17-OHP)抗体である1E9に変異を導入してcortisol結合能を持つ抗体を単離することを試みた。最初コンピュータを用いて抗原結合部の立体構造モデルを構築した。次に推定される抗原接触部に多様な変異を導入したライブラリーを構築した後cortisolを抗原にpanning法により抗cortisol抗体を単離した。この方法は一般性が高く、抗11-deoxycortisol(11-DC)抗体SCETを用いて抗cortisol抗体を得ることにも成功した。最後のスクリーニングの段階で、11-DCを過剰に共存させることにより11-DC結合能を大幅に減少した抗体の単離が可能になった。もう一つの研究はCDRの移植実験である。抗原結合部はCDRに位置するアミノ酸によって形成されるが、フレームワークに位置するアミノ酸の中にもCDRの立体構造に影響を与える残基が存在することが知られている。抗チトクロームC抗体E8と抗ニワトリ卵白リゾチーム抗体D1.3の間でV_HドメインのCDR移植実験を行ったところ、フレームワークの一部である94番目のアミノ酸がE8抗体に於てグリシン(E8)からアルギニン(D1.3)に変換するだけでチトクロームC結合活性を失う。その結合活性を失った抗体をコードする遺伝子を鋳型にしてerrorprone PCRを行い活性の回復した多数のクローンを解析したところ、94位の変異以外に、94位をアルギニンにしたまま101位の変異又は27,29位の同時変異でも活性の回復が起る。29,94,101位のアミノ酸に系統的な変異を導入したクローンを作製し、それぞれの特徴を調べた。その中でとりわけ101位は重要で、アスパラギン酸(E8)をアスパラギンに変化するだけで数10倍の結合活性の増加が起る。現在この中の代表的なクローンについて中村博士(生物分子光学研)と共同して立体構造解析によりこの現象の解明を進めている。

这项研究正在进行分析抗体CDR的氨基酸序列与抗原特异性之间的相关性。 1997年，取得了以下两个结果。类固醇中有各种衍生物。因此，使用抗类固醇抗体进行了抗原特异性转化实验。我们试图将突变引入1E9，一种抗体，抗17α-羟基孕酮（17-OHP）抗体，并释放具有皮质醇结合的抗体。最初，使用计算机构建了抗原 - 加入部分的三维结构模型。在估计的抗原接触部分中构建了具有多种突变的库后，通过用皮质醇作为抗原的平质方法将抗皮质醇抗体分离出来。该方法非常受欢迎，并成功地使用抗11-脱氧蛋白醇（11-DC）抗体COCT获得了抗皮质醇抗体。在最后一个筛选阶段，通过过度共存的11-DC并存，可显着降低11-DC结合能力。另一项研究是CDR移植实验。抗原连接部分是由位于CDR中的氨基酸形成的，但众所周知，框架中的一些氨基酸也会影响CDR的三维结构。抗铬CDR移植实验是在抗染色体CDR E8和抗蛋白Liza Team抗体D1.3和框架中的第94氨基酸（E8）中的第94个氨基酸（E8）中进行的精氨酸（D1.3）失去了壳核C键活性。分析了通过errorprone pcr恢复的许多克隆的分析，该基因对失去其结合活性的抗体进行了编码，除了第94位突变外，第94位是突变体或第101个位置突变或第101位，即使在第27,29位的同时突变中，活动的恢复也将发生。形成了一个在29,94,101的氨基酸中引入系统突变的克隆，并检查了每个特征。其中，第101位很重要，并且通过将天帕酸（E8）改为天冬酰胺，结合活性增加了几十次。目前，这种现象是由Nakamura博士（生物分子光学讲座法）阐明的，用于典型的克隆。