GADD45による細胞増殖抑制メカニズムの解析

GADD45抑制细胞生长机制分析

• 批准号: 09255246
• 负责人: 児玉 靖司
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09255246/
• 关键词: GADD45; 細胞周期チェックポイント; ataxia telangiectasia; 増殖抑制

Gadd(growth arrest and DNA damage inducible)45遺伝子は、DNA損傷により強く発現が誘導される遺伝子群の一つとしてCHO細胞から単離されたものである。GADD45の発現はp53依存的であり、その機能としてG1チェックポイント機構、あるいは除去修復機構への関与が示唆されているが、その詳細は明確ではない。我々は、Gadd45遺伝子の発現制御が可能なベクターを構築し、高発癌性遺伝病であり、放射線高感受性、及びp53応答経路をはじめとする細胞周期チェックポイント異常を特徴とするataxia telangiectasia(AT)細胞に導入する実験系を確立した。この系を用いて本研究では、AT細胞の表現形質とGadd45遺伝子との関係、及びGadd45遺伝子の機能について調べ、以下のことを明らかにした。(1)正常細胞では、細胞密度依存的にGADD45の発現が上昇するが、AT細胞ではこの現象は全く見られない。(2)AT細胞では、GADD45の構成的発現レベルが低く、放射線による発現誘導も約20時間遅延する。しかし、放射線による発現誘導は見られる。(3)我々が確立したGadd45導入AT細胞では、誘導剤添加後2時間という早期に放射線照射時と同等レベルのGADD45発現が見られる。また、誘導されたGADD45は、誘導剤除去後も48時間は細胞内で安定に存在する。(4)GADD45の高発現により、細胞増殖の遅延、および約40%のコロニー形成率低下が見られる。(5)GADD45の高発現は、AT細胞の放射線高感受性には全く影響を与えない。また、顕著なG1、およびG2停止、あるいはDNA合成率の低下を引き起こさない。以上の結果は、GADD45が細胞増殖抑制機能を担っていること、しかし、その抑制は細胞周期チェックポイント機構による細胞周期の停止を介するものではないことを示唆している。

GADD（生长停滞和DNA损伤诱导）45基因是从CHO细胞中分离出的，是由DNA损伤强烈诱导的基因组之一。 GADD45的表达取决于p53，这表明G1检查点机制或去除修复机制作为其功能，但细节尚不清楚。我们建立了一个可以表达GADD45基因的表达的载体，并且是一种高度致癌的遗传疾病，其特征是高敏感的放射学和细胞周期检查点，例如p53响应途径，并具有异常的细胞周期检查点在细胞中引入的实验系统。使用该系统，这项研究检查了AT细胞的表达结构与GADD45基因的表达结构与GADD45基因的功能之间的关系，并阐明了以下内容。 （1）在正常细胞中，GADD45的表达因细胞密度而增加，但在细胞中根本看不到这种现象。 （2）在AT细胞中，GADD45的组成较低，并且通过辐射诱导表达延迟约20小时。但是，可以看到辐射诱导表达。 （3）在GADD45引入我们已经建立的细胞中，GADD45表达式与辐射辐射相同的水平，在添加引导剂后2小时，可以看到。去除诱导剂后，引导的GADD45稳定存在48小时。 （4）GADD45的高表达显示细胞增殖延迟，菌落形成率降低约40％。 （5）GADD45的高表达根本不会影响细胞的辐射和高灵敏度。它不会引起显着的G1，G2停止或DNA合成的降低。以上结果表明GADD45负责细胞生长抑制功能，但是该抑制不会通过细胞周期检查点机制的细胞周期周期。