HLA領域にマップされる免疫病の原因遺伝子と同定の分子機構の解明

阐明识别 HLA 区域免疫致病基因的分子机制

• 批准号: 08282235
• 负责人: 猪子 英俊
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08282235/
• 关键词: HLAクラスl領域; ベーチェット病; 尋常性乾癬; 強直性脊椎炎; 塩基配列解析; 疾患原因遺伝子; cDNAクローニング; 発現遺伝子

HLAクラスl領域に原因遺伝子がマップされる免疫病のうち、HLA-B51と相関するベーチェット病、HLA-Cw6とCw7に相関する尋常性乾癬、HLA-B27と相関する強直性脊椎炎に注目し、それらの原因遺伝子の同定をめざして、まずHLA領域の散在する19個の多型をしめす遺伝マーカーを利用して、原因遺伝子のマッピングを施工した。その結果、ベーチェット病はHLA-BとMICA遺伝子周辺の非HLA遺伝子、尋常性乾癬はHLA-C遺伝子周辺の非HLA遺伝子、強直性脊椎炎はHLA-B27遺伝子それ自身が原因遺伝子と、考えられた。そこで、ベーチェット病のHLA-BとMICA遺伝子周辺の非HLA遺伝子、並びに尋常性乾癬のHLA-C遺伝子周辺の非HLA遺伝子の単離のために、クラスl遺伝子領域についての構造解析を行った。すなわち、MICA-HLA-A-HLA-C遺伝子付近をカバーするコスミドクローン14個の計452kbの塩基配列を決定した。そこで、これらの塩基配列のデータについて、BLASTn、BLASTx、FASTAの各プログラムを用いたホモロジー検索を行い、またコーディングやエキソン領域の予測は、X-GrailとHEXONの各プログラムを用いて行った。ホモロジーの検索やコーディング領域の予測により、遺伝子の存在が予想された領域について、塩基配列データに基づいて設計したプライマーを用いたRT-PCR、ノザンハイブリダイゼーション、cDNAライブラリーのスクリーニングによるcDNAクローンの単離により、新発現遺伝子の同定を行った。その結果、この領域に21個(これらの内、10個は既知の遺伝子で11個が新遺伝子)の遺伝子とESTとヒットする7ケ所の領域をみいだすことができた。また、この領域に、35個のdinucleotide繰り返しが見い出され、今後本領域にマップされる疾患の感受性遺伝子の同定に有効な遺伝マーカーになると考えられた。

在致病基因定位于 HLA L 类区域的免疫疾病中，我们重点关注与 HLA-B51 相关的白塞氏病、与 HLA-Cw6 和 Cw7 相关的斑块状银屑病以及与 HLA-Cw6 和 Cw7 相关的强直性脊柱炎。为了识别致病基因，我们首先使用分布在 HLA 区域的 19 个多态性遗传标记来绘制致病基因图谱。因此，白塞氏病被认为是由 HLA-B 和 MICA 基因周围的非 HLA 基因引起的，斑块状银屑病是由 HLA-C 基因周围的非 HLA 基因引起的，强直性脊柱炎被认为是由 HLA-B 和 MICA 基因周围的非 HLA 基因引起的。 HLA-B27 基因本身。因此，为了分离白塞氏病的HLA-B和MICA基因周围的非HLA基因，以及斑块状银屑病的HLA-C基因周围的非HLA基因，我们对I类基因区域进行了结构分析。即，确定了覆盖MICA-HLA-A-HLA-C基因附近的14个粘粒克隆的总计452kb的碱基序列。因此，使用BLASTn、BLASTx和FASTA程序对这些核苷酸序列数据进行同源性搜索，并使用X-Grail和HEXON程序进行编码和外显子区域预测。通过 RT-PCR、Northern 杂交和 cDNA 文库筛选，使用根据同源性搜索预测基因存在的区域的核苷酸序列数据设计的引物来分离 cDNA 克隆，并通过分离鉴定新表达的基因。结果，我们能够找到 21 个基因（其中 10 个是已知基因，11 个是新基因）和 7 个在该区域中命中 EST 的区域。此外，在该区域还发现了35个二核苷酸重复，这被认为是未来识别该区域疾病易感基因的有效遗传标记。

项目成果

Bahram S,et al.: "Genomic structure of the human MHC class I MICB gene." Immunogenetics. 45. 161-162 (1996)

Bahram S 等人：“人类 MHC I 类 MICB 基因的基因组结构。”

Inoko H,et al.: "Cloning,sequencing and evolutionary analyses of the human major histocompatibility complex (MHC) region." DNA Sequencing-J.Sequencing Mapping. 71. 31-32 (1996)

Inoko H 等人：“人类主要组织相容性复合体 (MHC) 区域的克隆、测序和进化分析。”

清沢研道、他: "Schering-Plough Liver Forum (Tokyo)自己免疫性肝炎の背景因子-HLAの面より解析" Life Science Publishing, 19-24. (1996)

Kendo Kiyosawa 等：“先灵葆雅肝脏论坛（东京）自身免疫性肝炎的背景因素 - 从 HLA 角度进行分析”生命科学出版，19-24（1996）。

高田肇、猪子英俊: "ネオ生物学シリーズ第9巻 ゲノムからみた新しい生物像-「ヒト」遺伝子が語るヒトのすがた" 共立出版, 83-100. (1997)

Hajime Takada、Hidetoshi Inoko：“新生物学系列第 9 卷：从基因组中看到的生物体新图景 - “人类”基因讲述的人类形象”Kyoritsu Shuppan，83-100 (1997)。

Fukagawa T,et al.: "Human pseudoautosomal boundary-like sequences (PABLs) ; core sequence,expression,and evolution." Human Molecular Genetics. 5. 23-32 (1996)

Fukakawa T,et al.：“人类伪常染色体边界样序列（PABL）；核心序列、表达和进化。”