ジーンターゲティングマウスを用いたB細胞レパートリー形成機構の研究

利用基因打靶小鼠研究B细胞库形成机制

基本信息

批准号：
08282206
负责人：
瀧伸介
金额：
$ 1.98万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

報告者は本年度、IgV遺伝子(VHT15)をJH遺伝子座に挿入した変異(T15i)をヘテロに持つマウス(T15i/+マウス)においては、ある割合でVHT15遺伝子が破壊され、野生型IgH発現B細胞が生じることを利用し、B細胞一次レパートリー形成は遺伝的に支配されていること、VHT15陽性細胞が低値を示す形質が優性であり、おそらく単一の遺伝子の支配が主である事、対立遺伝子である野生型IgH遺伝子のアロタイプ、軽鎖遺伝子(k鎖)はこの遺伝子ではない事を明らかにした。また、リンパ球のアポトーシスに重要である転写因子IRF-1を欠損し、T15i変異をヘテロに持つマウスを制作したが、このマウスでは末梢のVHT15陽性B細胞比率は野生型マウスと同様であり、少なくとも一次レパートリーの形成にはIRF-1は無関係であることは明らかに出来た。更に、体細胞突然変異による新たな特異性の生成を研究するために、monospecificマウスを、すなわち、T15iマウスと、新たに樹立したk鎖トランスジェニックマウスを掛け合わせ、唯一の特異性を持つマウスを作製しようとしている。現在、k鎖トランスジーンのgermlineへの導入を確認し、またその発現を確認済みである。先に述べたようにT15i/+マウスでは、VHT15陽性B細胞の末梢B細胞中での比率は約半数以下であるが、このk鎖トランスジーンを持つマウスにおいてはほとんどすべてのB細胞がVHT15陽性となり、VHT15鎖とこのk鎖のペアがポジティブに選択され、このk鎖と野生型IgH発現B細胞を凌駕してしまった可能性が考えられる。

今年，作者发现，在具有突变（T15i）的杂合小鼠（T15i/+小鼠）中，其中IgV基因（VHT15）被插入JH位点，VHT15基因在一定比例的B中被破坏。表达野生型 IgH 的细胞利用这一事实树的形成是由基因控制的，其中VHT15阳性细胞表现出低水平的性状是显性的，并且可能由单个基因主导；野生型IgH基因的同种异型是等位基因；（k链）不是这个基因。此外，我们还培育了缺乏对淋巴细胞凋亡很重要的转录因子IRF-1并具有杂合T15i突变的小鼠，但这些小鼠外周VHT15阳性B细胞的比例与野生型相似很明显，IRF-1 至少不参与主要库的形成。此外，为了研究通过体细胞突变产生新的特异性，我们将单特异性小鼠（即T15i小鼠）与新建立的k链转基因小鼠杂交，以产生具有独特特异性的小鼠。目前，我们已经确认将k链转基因导入种系并确认其表达。如前所述，在T15i/+小鼠中，外周B细胞中VHT15阳性B细胞的比例不到一半，但在携带这种k链转基因的小鼠中，几乎所有B细胞都是VHT15阳性，因此有可能。表明VHT15链和这条k链对是正选择的，并且它可能已经超越了表达这条k链和野生型IgH的B细胞。