HIV潜伏感染細胞の抗ミリストイル化剤による感染性ウイルス産生能消失機構

HIV潜伏感染细胞中抗肉豆蔻酰化剂丧失感染性病毒产生能力的机制

基本信息

批准号：
08269101
负责人：
庄司省三
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08269101/
关键词：
HIV-1 N-Myristoylation Bystander effect

项目摘要

HIV-1固有の産物に直接作用する阻害剤等はウイルスの持つ易変異原性のため,耐性ウイルスの出現を容易にし,人類のエイズ制圧の夢を打ち砕いている。申請者等は細胞性因子に一次的に作用し,その結果,bystander効果的にHIV-1を不活性化する生化学的反応を考え,タンパク質のN-ミリストイル(N-Myr)化反応に着目した。HIV-1潜伏感染細胞(ACH-2,2×10^5 cells/ml)を,最終濃度が50μMになるようにN-Myr化阻害剤を投与し,24時間培養後,ホルボールエステルによりウイルス産生活性化した後,さらに24時間培養した。細胞は経時的に回収し,western blot分析,培養上清中のp24抗原定量,及び逆転写酵素活性測定を行い,抗HIV活性を測定した。対照として,N-Myr化阻害剤未処理HIV-1潜伏感染についても同様に実験を行った。N-Myr化を阻害した結果,ウイルス構成gagタンパク質前駆体Pr55の細胞内蓄積及び培養上清中の娘ウイルス感染性の消失が認められた。しかしながら,培養上清中のp24抗原量および逆転写酵素活性において,対照実験と有意な差は認められなかった。このことから,N-Myr化阻害剤は娘ウイルスの感染性を消失させることが明らかになった。また,N-Myr化阻害剤処理及び未処理HIV-1潜伏感染細胞から産生される娘ウイルス粒子の形態を,透過型電子顕微鏡により観察した結果,N-Myr化阻害剤処理HIV-1潜伏感染細胞から産生される娘ウイルス粒子の形態は,涙型を呈し,正常な娘ウイルス粒子の形態とは著しく異なっていた。さらに,免疫電顕法によりgag及びenvタンパク質の感染細胞内局在観察した結果,N-Myr化阻害によるgag-envの会合の阻害及びenvタンパク質の発現抑制が認められ,bystander効果剤が画期的な抗エイズ剤になりうることを明確にした。

直接作用于HIV-1特异性产品的抑制剂，由于病毒的致突变性，很可能导致耐药病毒的出现，从而粉碎人类根除艾滋病的梦想。申请人专注于蛋白质的 N-肉豆蔻酰化 (N-Myr) 反应，考虑到主要作用于细胞因子的生化反应，从而有效地灭活 HIV-1。 HIV-1潜伏感染细胞（ACH-2，2 x 10^5 cells/ml）用终浓度50 μM的N-Myrization抑制剂处理，培养24小时后，用佛波酯感染病毒生产激活后，将细胞进一步培养24小时。随着时间的推移收集细胞，并通过蛋白质印迹分析、培养物上清液中的p24抗原定量和逆转录酶活性测量来确定抗HIV活性。作为对照，对未经 N-Myrylation 抑制剂治疗的 HIV-1 潜伏感染进行了类似的实验。由于抑制 N-Myrization，观察到病毒成分 gag 蛋白前体 Pr55 在细胞内积累，并且培养物上清液中子代病毒感染性丧失。然而，与对照实验相比，培养物上清液中p24抗原的量和逆转录酶活性没有观察到显着差异。这些结果表明，N-Myrization 抑制剂消除了子病毒的感染性。另外，使用透射电子显微镜观察N-Myrization抑制剂处理和未处理的HIV-1潜伏感染细胞产生的子病毒颗粒的形态，由细胞产生的子病毒颗粒的形态为泪滴状。与正常子病毒颗粒显着不同。此外，通过免疫电子显微镜观察感染细胞中gag和env蛋白的定位，结果发现，抑制N-Myrization可抑制gag-env的结合，从而抑制env蛋白的表达。该药可作为有效的抗艾滋病药物。