ADF(ATL由来因子)/チオレドキシンの脳内発現と神経細胞死‐ラジカル消去作用と虚血脳保護効果‐

ADF（ATL衍生因子）/硫氧还蛋白的脑表达和神经元细胞死亡-自由基清除作用和缺血性脑保护作用-

基本信息

批准号：
08256215
负责人：
秋口一郎
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08256215/
关键词：
ADF TRX 遅発神経細胞懐死脳虚血アストログリアフリーラジカル

项目摘要

ADF/TRXは、ヒト成人型T細胞白血病患者から確立されたT細胞株の培養上清に発見されたタンパクである。本因子はSODによって生成される過酸化水素を捕捉し、培養神経細胞の生存率を改善する効果が認められている。我々はADF/TRXが一過性全能虚血モデルで脳保護効果を示すことを報告してきた。本年度はヒトの脳梗塞に近似する一過性局所脳虚血で同様の検討を行い、併せてラジカル関連分子の変化について検討した。局所脳虚血はラットの中大脳動脈をナイロン糸で閉塞し作成した。閉塞30分前に、ADF/TRX20μgを20μlの人口脳脊髄液に溶解し側脳室内に注入した。24時間後に脳の1mm厚切片をTTC染色し、LUZEX3U画像解析装置で梗塞面積を定量した。測定はブレグマの前後4スライスで行い、人口脊髄液投与群で19.2±14.5、23.7±9.3、22.4±10.7、15.2±10.2、ADF/TRX投与群で13.0±9.4、27.7±11.9、28.1±14.3、21.7±18.7mm2(Mean±SD)と両群で差を認めなかった。さらに一過性局所脳虚血における一酸化窒素合成酵素(NOS)の変化をNOS免疫組織化学、NADPHジアホラーゼ(NADPHd)染色で検討した。前述のモデルで2時間後に再灌流し、虚血直後または3時間から7日間生存後灌流固定した。偽手術群で神経型NOS(bNOS)は散在する神経細胞に陽性であった。虚血群で直後から虚血中心部に数珠状のbNOS陽性線維が出現し、3日後まで持続した。再灌流6時間以後細胞体の変性像を認め、時にbNOS陽性グリアを梗塞巣周辺部で認めた。NOSのマーカーのNADPHd組織化学でも、2時間後の虚血後bNOS免疫染色と同様に数珠状変化が認められ、梗塞巣周辺で時にNADPHd陽性グリアを認めた。対照のアセチルコリンエステラーゼ染色、セロトニン免疫染色では再灌流直後の線維形態の変化は認めず12時間以後線維密度が減少した。内皮型NOS(eNOS)は血管内皮に陽性で、免疫電顕法で主に粗面小胞体に極在した。再灌流12時間から3日にかけて梗塞巣周辺部で血管内皮のeNOS染色とNADPHd染色性が増強していた。以上(1)ADF/TRXの保護効果は局所脳虚血モデルでは確認できなかった。この原因として再灌流を行わなかった点が挙げられる。(2)bNOS陽性神経細胞は、神経突起部で虚血の早期から特異的に変化する。eNOSは染色性が虚血周辺部で一過性に増強する。

ADF/TRX 是在成人 T 细胞白血病患者建立的 T 细胞系的培养上清液中发现的一种蛋白质。该因子已被证明可以有效捕获 SOD 产生的过氧化氢并提高培养神经元的存活率。我们报道 ADF/TRX 在短暂性脑缺血模型中表现出脑保护作用。今年，我们对短暂性局灶性脑缺血进行了类似的研究，与人类脑梗塞相似，也研究了自由基相关分子的变化。用尼龙线闭塞大鼠大脑中动脉，造成局灶性脑缺血。封堵前30分钟，将20μg ADF/TRX溶解于20μl人工脑脊液中，注入侧脑室。 24小时后，用TTC对1毫米厚的脑切片进行染色，并使用LUZEX3U图像分析仪对梗塞面积进行量化。前囟前后各4片进行测量，人工脊髓液给药组：19.2±14.5、23.7±9.3、22.4±10.7、15.2±10.2、ADF /TRX给药组：13.0±9.4、27.7±11.9、28.1±14.3、21.7±18.7mm2(Mean±SD)，两组之间没有观察到差异。此外，使用 NOS 免疫组织化学和 NADPH 黄酶 (NADPHd) 染色研究了短暂性局灶性脑缺血期间一氧化氮合酶 (NOS) 的变化。在上述模型中，2小时后对细胞进行再灌注，并在缺血后或存活3小时至7天后立即进行灌注固定。在假手术组中，神经元一氧化氮合酶（bNOS）在分散的神经元中呈阳性。缺血组缺血后立即在缺血中心出现珠状bNOS阳性纤维，并持续至3天后。再灌注6小时后，观察到细胞体变性，梗塞周围有时可见bNOS阳性胶质细胞。 NADPHd 组织化学（一种 NOS 标记物）在缺血 2 小时后显示出类似于 bNOS 免疫染色的珠状变化，并且有时在梗塞周围观察到 NADPHd 阳性神经胶质细胞。对照乙酰胆碱酯酶染色和血清素免疫染色显示再灌注后纤维形态没有变化，但12小时后纤维密度下降。免疫电镜显示，血管内皮细胞内皮型一氧化氮合酶（eNOS）呈阳性，主要位于粗面内质网。再灌注后12小时至3天，梗塞周围血管内皮细胞的eNOS染色和NADPHd染色增加。 (1)在局灶性脑缺血模型中无法证实ADF/TRX的保护作用。这可能是由于未进行再灌注所致。 (2)bNOS阳性神经元从缺血早期开始在神经突区域发生特异性变化。 eNOS 染色在缺血周围短暂增强。