標的遺伝子組換えによる変異マウスを用いたリンパ球シグナル伝達の研究

靶向基因重组突变小鼠淋巴细胞信号转导研究

基本信息

批准号：
08252209
负责人：
北村大介
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Tokyo University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1, 抗原受容体からのシグナルは、成熟リンパ球細胞においては活性化を、未熟リンパ球細胞においてはアポトーシスを引き起こす。この2つの異なる細胞反応を決定するシグナル伝達機構を解明するために、本研究では標的組み換えによる遺伝子変異マウスを解析した。抗原受容体シグナル伝達に重要な役割を果たすLyn,Fyn,Syk等の非受容体型チロシンキナーゼ(PTK)の細胞内基質であるHS1の欠損マウスでは、sIgM架橋による腹腔B細胞のアポトーシス誘導と胸腺T細胞のアポトーシスによる陰性選択が不完全なことが明らかになった。よってHS1蛋白はBおよびT細胞において抗原受容体からのアポトーシスを誘導するシグナル伝達の少なくとも一部を担っていることが示された。一方、Lyn遺伝子ノックアウトマウスでは、抗IgM抗体刺激によるHS1やその他のPTKの細胞内基質蛋白のチロシンリン酸化が著減していた。リンパ芽球様細胞およびプラズマ細胞の異常増加と脾臓リンパ節の腫大、血中抗体価の異常高値、自己抗体および自己免疫性腎病変などの異常が観察された。従ってLynは自己反応性B細胞の陰性選択とB細胞の最終分化の制御に重要な役割を果たしている考えられた。2, アポトーシス誘導シグナルに関わる新たな経路を解明するために、抗原受容体架橋によりアポトーシスに陥るB細胞WEHI-231とその耐性変異株との間でcDNAサブトラクション法を行い、耐性株において発現の欠損する新規遺伝子cDNAを単離した。また、HS1の作用機序解明のために、two hybrid法によりHS1結合蛋白の遺伝子cDNAを同定した。今後、これらの遺伝子の生理機能を標的組換え法により解明したい。さらに現在、抗原受容体シグナルの標的と考えられるc-myc遺伝子の組織特異的・誘導性ノックアウトマウスの作製を進めている。これらの変異マウスの解析を通して、リンパ球アポトーシスを誘導する抗原受容体シグナル経路を分子レベルで解明したい。

1. 来自抗原受体的信号引起成熟淋巴细胞的激活和未成熟淋巴细胞的凋亡。为了阐明决定这两种不同细胞反应的信号转导机制，在这项研究中，我们分析了通过靶向重组产生的基因突变小鼠。 HS1 是非受体酪氨酸激酶 (PTK)（例如 Lyn、Fyn 和 Syk）的细胞内底物，在抗原受体信号转导中发挥重要作用，HS1 缺陷的小鼠通过 sIgM 交联诱导腹膜 B 细胞凋亡并诱导胸腺 T 细胞很明显，细胞凋亡的阴性选择是不完全的。因此，表明HS1蛋白至少负责诱导B细胞和T细胞中抗原受体凋亡的部分信号转导。另一方面，在 Lyn 基因敲除小鼠中，当用抗 IgM 抗体刺激时，细胞内基质蛋白（如 HS1 和其他 PTK）的酪氨酸磷酸化显着降低。观察到淋巴母细胞和浆细胞异常增多、脾淋巴结肿大、血液抗体滴度异常高、自身抗体和自身免疫性肾脏病变等异常情况。因此，Lyn被认为在自身反应性B细胞的阴性选择和B细胞终末分化的控制中发挥着重要作用。 2. 为了阐明参与凋亡诱导信号的新途径，我们对因抗原受体交联而发生凋亡的 B 细胞 WEHI-231 及其耐药突变株进行 cDNA 消减，发现耐药突变株我们分离出一个新的基因 cDNA。此外，为了阐明HS1的作用机制，我们使用两种混合方法鉴定了HS1结合蛋白基因的cDNA。未来，我想通过靶向重组方法阐明这些基因的生理功能。此外，我们目前正在创建 c-myc 基因的组织特异性诱导型敲除小鼠，该基因被认为是抗原受体信号的目标。通过对这些突变小鼠的分析，我们希望在分子水平上阐明诱导淋巴细胞凋亡的抗原受体信号通路。