クライオストップトフローX線散乱法による蛋白質フォールディング初期中間体の解析

使用冷冻流动 X 射线散射分析早期蛋白质折叠中间体

基本信息

批准号：
07280226
负责人：
木原裕
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

今回の重点研究の私の研究課題はフォールディング初期中間体として表出すると思われる2次構造形成過程と球状化過程を-50℃近くの温度環境下で直接検出しようとする試みである。2次構造形成は,もしそれがヘリックス・コイル転移速度と同じとすれば,常温でμsのオーダーと思われる。これは温度を下げることにより,遅くすることが可能(?)で、-50℃付近まで下げられれば,ストップフロー法の不感時間(数ms)内で充分観測可能となることが期待される。以上の問題意識に則って,今年は次のような研究を行った。(1)-50℃における蛋白質のフォールディングの研究のために,CDとX線散乱用の装置を組み立てた。ストップトフローCDについては,既に組み立て終えた。一方,ストップトフローX線散乱装置については,1月末に組み立てが終わった。装置の性能テストが当面する課題である。(2)ポリペプチド溶液をモデル物質そひて,コイル→ヘリックス転移をヘリックス安定溶剤を用いて起こさせ,ヘリックス・コイル転移をストップトフローCD法で検出すること,ミオグロビンを対象に,低温においてフォールディング,アンフォールディングをおこさせるよい条件を探すこを試み始めている。まだやっと手がけ始めたところで,現在の所,報告できる成果はまだない。場合によっては,ヘリックス安定剤(例えば,トリフルオロエタノール)を加えることにより,フォールディングをさせる必要があると思われる。

我在此优先研究中的研究主题是试图直接检测二级结构形成过程和大量测量过程，这些过程被认为是早期折叠的早期中级。如果二级结构形成与螺旋线圈传输速度相同，则似乎是室温下的μs顺序。可以通过降低温度来减慢（？），如果将其降低至接近-50°C，则可以预期它将在秒流法（几毫秒）中充分观察到。根据上述意识，今年我们进行了以下研究。（1）组装CD和X射线散射装置，用于研究-50°C时蛋白质的生合。停止流CD已经组装。另一方面，止损X射线散射设备的组装在1月底完成了。该设备的性能测试暂时是一个挑战。（2）型号溶液，线圈→螺旋转移使用螺旋稳定的溶剂，检测螺旋和螺旋流量的转移，并在低温下折叠Mioglobin，我们开始找到良好的条件来实现统一。现在我们已经开始工作了，目前尚无报告。在某些情况下，有必要添加螺旋稳定剂（例如，三氟乙醇）进行折叠。