チロシンリン酸化酵素関連分子の遺伝子ターゲティング法によるがん化分子機構の解析

利用酪氨酸激酶相关分子的基因靶向分析致癌的分子机制

基本信息

批准号：
07273271
负责人：
八木健
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07273271/
关键词：
Fyn p53 ジーンターゲティング胸腺腫発がん Src T細胞チロシンリン酸化酵素

项目摘要

1.p53とFynの二重遺伝子欠損マウスの作製とその解析:遺伝子ターゲティング法により得たp53とFyn欠損マウスの交配により、p53とFynを二重に欠損させたマウス作製を行った。その結果、p53欠損マウスでは全個体(20例)が生後7ヶ月齢までに全てがん発症により死亡したのに対し、p53とFynを二重に欠損させたマウスではがんの発症が6ヶ月齢をすぎても認められず、p53欠損によるがん発症特に胸腺腫発症にFynが重要な役割を果たしていることが明らかとなった。p53欠損による胸腺腫においてFynが過剰発現してがん化を引き起こすことが考えられたが、Fynの発現はむしろ胸腺腫細胞では減少していた。また、Fyn欠損個体では約1/10が突然死するが、興味深いことにp53とFynを二重に欠損させたマウスではこの傾向が高まり、7ヶ月齢までに約半数の個体が突然死した。2.抗Fynモノクローナル抗体の作製:我々は本年度、新たにFynに対するモノクローナル抗体を作製することに成功し、その抗体を用いてプロB細胞中での細胞増殖、分化過程におけるFynの局在を西川等との共同研究により明らかにした。その結果、Fynが細胞増殖の際に収縮環や紡錘体上に存在していることを明らかにした。また、Fyn欠損プロB細胞ではIL-7増殖下において細胞分裂が収縮環がくびれる際に止まることが明らかとなり、実際に細胞増殖過程でFynが機能していることが確かめられた。3.Fyn結合分子の解析:Fynが実際にがん発症や細胞増殖の際にどの様な細胞内情報伝達系と関連し機能するかを明らかにする目的で、Fynと結合する分子の単離を行っている。FynのSrcファミリー間で保存されていない領域、SH2、SH3と結合する分子を酵母2ハイブリッド系を用いて単離した。その結果、現在までにSrcファミリーと結合することが報告されているhnRNPが得られた他、4種類の新規分子の単離に成功した。現在解析を進めている。本研究により、チロシンリン酸化酵素のFynが実際のp53欠損によるがん発症に関連することを明らかにすることができた。今後の解析により、がん発症の初期過程での分子機構の解明が期待される。

1。通过跨越遗传靶向方法获得的p53和FYN缺乏小鼠，对p53和FYN的双基因缺陷小鼠进行了分析。结果，由于癌症的发作7个月，p53缺乏的小鼠中的所有个体（20例）死亡，而p53和fyn在小鼠中均为双重缺陷，甚至没有识别出Fyn。如果他年纪太大，尤其是由于p53缺陷引起的癌症发作。可以想象，Fyn在p53缺陷中被过高，导致癌症，但Fyn的表达却被胸腺瘤细胞降低了。此外，大约有1/10的Fyn缺乏症突然死亡，但有趣的是，这只老鼠增加了P53和Fyn的两倍，增加了这种趋势，大约一半的人突然在七个月的时间内死亡。 2。抗-fyn单克隆抗体的产生：我们今年成功地生产了FYN的单克隆抗体，并使用抗体在差异化过程中揭示了位于Fyn的Nishikawa的专业B细胞中的细胞生长。有了等等。结果，发现在细胞生长时，Fyn存在于收缩环或纺锤体上。此外，很明显，当控制环在FYN缺陷型专业B细胞的增殖中，控制环在IL-7增殖下被限制时停止，并且已经证实FYN实际上在细胞增殖过程中起作用。 3.FYNA分析：分析与FYN结合的分子，以阐明在癌症或细胞增殖的情况下，在细胞内信息传递系统中的功能将起作用。使用酵母2混合系统分离出Fyn SRC家族之间未存储的分子。结果，据报道与SRC家族结合的HNRNP已经成功，并且成功地隔离了四种新分子。我们目前正在进行分析。这项研究表明，FYN是一种氧化酪氨酸酪氨酸，与由于实际p53缺陷引起的癌症发作有关。预计未来的分析将在癌症发作的早期过程中阐明分子机制。