B細胞免疫寛容とメモリーB細胞分化の分子機構の解析

B细胞免疫耐受和记忆B细胞分化的分子机制分析

基本信息

批准号：
07257204
负责人：
徳久剛史
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07257204/
关键词：
c-fos メモリーB細胞クラススイッチトランスジェニックマウス

项目摘要

本研究は、メモリーB細胞の分化機構をc-fos遺伝子のレベルで解明することを目的とする。そのためc-fos遺伝子を恒常的に発現するトランスジェニックマウス(H2-c-fos)や遺伝子誘導型のトランスジェニックマウス(Mx-c-fos)を用いた。H2-c-fosマウスは抗原で刺激してもIgGクラスの抗体産生が見られない。そこでG2-c-fosマウスを抗原で刺激した後の脾臓におけるIgG^+B細胞の分化能を病理学的にまた蛍光抗体とFACSを用いて解析した。その結果、胚中心の形成がほとんど見られずIgG^+B細胞が検出出来なかったことから、IgGクラススイッチ過程を含むメモリーB細胞の分化段階が障害されていることが明らかになった。つぎにIgGクラススイッチ過程の異常かどうかを調べる目的で、H2-c-fosマウス由来のB細胞をLPSとIL-4とともに培養した時のIgG1陽性B細胞を蛍光抗IgG1抗体とFACSを用いてまたIgG1抗体産生量をELISA法で解析した。その結果、IgG1クラススイッチが見られず、IgG1抗体産生も見られなかった。そこで、Mx-c-fosB細胞をLPSとIL-4とともに培養した時のIgG1抗体生産量をELISA法で解析した。そのとき、培養系に経時的に誘導剤を添加してc-Fosの発現を誘導することにより、IgG1クラススイッチ過程の異常を解析した。その結果、c-fos発現誘導を培養後2-4日目に行うとIgG1へクラススイッチしつつあるB細胞がアポトーシスで死滅した。ところが発現誘導を培養の4日目以降におこなってもIgG1へクラススイッチしたB細胞は抗体産生細胞へ分化できた。培養後2-4日目にB細胞内でIgG1へのクラススイッチ(遺伝子組み換え)が起きることから、過剰のc-fosはB細胞のクラススイッチ過程において細胞死を誘導することが明らかになった。

本研究的目的是在c-fos基因水平上阐明记忆B细胞的分化机制。因此，我们使用组成型表达c-fos基因的转基因小鼠（H2-c-fos）和基因诱导型转基因小鼠（Mx-c-fos）。即使用抗原刺激，H2-c-fos 小鼠也不会产生 IgG 类抗体。因此，我们分析了G2-c-fos小鼠脾脏中IgG^+ B细胞在抗原刺激后、病理学上以及使用荧光抗体和FACS的分化潜力。结果，几乎观察不到生发中心的形成，并且无法检测到IgG^+ B细胞，表明记忆B细胞的分化阶段，包括IgG类别转换过程受损。接下来，为了调查IgG类别转换过程是否存在异常，我们使用荧光抗IgG1抗体和FACS，用LPS和IL-4培养来自H2-c-fos小鼠的IgG1阳性B细胞。，使用 ELISA 分析产生的 IgG1 抗体的量。结果，没有观察到IgG1类别转换，并且没有观察到IgG1抗体产生。因此，我们使用ELISA来分析Mx-c-fosB细胞与LPS和IL-4一起培养时产生的IgG1抗体的量。当时，通过随着时间的推移向培养系统中添加诱导剂来诱导c-Fos表达，分析了IgG1类别转换过程中的异常情况。结果，当培养后2-4天诱导c-fos表达时，正在类别转换为IgG1的B细胞因凋亡而死亡。然而，即使在培养第四天后进行表达诱导，类别转换为 IgG1 的 B 细胞也能够分化为抗体产生细胞。培养后2-4天，B细胞发生类别转换为IgG1（基因重组），表明过量的c-fos在B细胞的类别转换过程中诱导细胞死亡。