サイトカインシステムにおけるシグナル伝達と遺伝子発現機構の解析

细胞因子系统中的信号转导和基因表达机制分析

基本信息

批准号：
03258227
负责人：
谷口維紹
金额：
$ 16万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

サイトカイン系におけるシグナル伝達機構の解明を目的とし、インタ-ロイキン2(ILー2)系をモデルシステムとして用い、ILー2受容体β鎖を介する細胞内情報伝達機構の解析を行った。昨年度にはβ鎖の下流に位置しβ鎖と共役するシグナル伝達分子として、リンパ球特異的に発現しているsrcファミリ-チロシンキナ-ゼp56^<lck>を同定し、加えてこれら分子間の相互作用に必須な領域を両分子において同定した。本年度は更に、p56^<lck>とβ鎖の会合がILー2による細胞内タンパクチロシンリン酸化亢進に必須であることを明らかにした。しかしながら、β鎖を発現させた細胞に活性型p56^<lcl>を導入してもILー2依存性を失わないことからILー2による増殖性シグンル伝達にはチロシンキナ-ゼ経路以外のものも重要であることが考えられる。ILー2によって核内プロトオンコジ-ンcーfos,cーjun及びcーmycのmRNA発現が効率良く誘導されるが、“acidic region"を欠失させたβ鎖はcーfos,cーjunのmRNA発現を誘導することが出来なかった。一方、“serineーrich region"を欠失させたβ鎖についてはいずれかのmRNAの誘導もほとんど検出されなかった。このことからβ鎖各細胞内領域と、これら遺伝子の誘導には機能的連関があることが考えられる。サイトカイン遺伝子の発現機構の解明を目的とし、インタ-フェロン系においてその解析を行った。本年度は転写調節因子IRFー1がIFNーβ遺伝子及びINFー誘導遺伝子の発現に果す役割を詳細に検討する為、IRFー1cDNAのアンチセンスまたはセンスRNAを強制発現する細胞株を樹立した。センスRNAを発現する細胞株では、コントロ-ル細胞に比べ、polt(rI):(rc)刺激及びウイルス感染によるIFNーβの誘導ならびにIFNー誘導遺伝子(MHCクラスI分子)の発現は顕著に増加した。一方、アンチセンスRNAを発現する細胞株ではこれらの遺伝子の誘導が抑制された。このことから、IRFー1が実際に細胞内でIFNーβおよびMHCクラスI遺伝子の発現においてポジティブに作用していることが明かとなった。

为了阐明细胞因子系统中的信号转导机制，我们以白介素2（IL-2）系统为模型系统，分析IL-2受体β链介导的细胞内信息转导机制。去年，我们鉴定了 SRC 家族酪氨酸激酶 p56^<lck>，它在淋巴细胞中特异性表达，作为位于 β 链下游的信号转导分子，并在两者中鉴定了与 β 链相互作用所必需的区域。分子。今年，我们进一步揭示了p56^<lck>与β链的关联对于IL-2增强细胞内蛋白酪氨酸磷酸化至关重要。然而，即使将活化的p56^lcl导入表达β链的细胞中，对IL-2的依赖性也不会丧失。因此，认为IL-2的增殖信号传递涉及酪氨酸激酶途径以外的过程。重要的。 IL-2可有效诱导核原癌基因c-fos、c-jun和c-myc的mRNA表达，但删除了“酸性区”的β链则无法诱导其mRNA表达。另一方面，对于删除了“丝氨酸丰富区域”的β链，几乎没有检测到任一mRNA的诱导。这表明β链的每个细胞内区域与这些基因的诱导之间存在功能关系。为了阐明细胞因子基因的表达机制，我们对干扰素系统进行了分析。今年，为了详细研究转录调节因子IRF-1在IFN-β基因和INF诱导基因表达中所起的作用，我们建立了强制表达IRF-1 cDNA反义或正义RNA的细胞系。在表达有义RNA的细胞系中，polt(rI):(rc)刺激和病毒感染对IFN-β的诱导和IFN诱导基因（MHC I类分子）的表达显着高于对照细胞。另一方面，这些基因的诱导在表达反义RNA的细胞系中受到抑制。这些结果表明IRF-1实际上对细胞内IFN-β和MHC I类基因的表达产生积极作用。