神経系培養細胞の分化、機能発現の制御に関わるガングリオシドの役割

神经节苷脂在调节培养神经系统细胞分化和功能表达中的作用

基本信息

批准号：
03255215
负责人：
玉井洋一
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

PC12細胞はnerve growth factor(NGF)に応答してneuriteを形成し、ガングリオシド構成も変化する。我々は今までに特定のガングリオシド構成の変化は分化の方向に始動したprimed細胞の方が高く、またアセチルコリンエステラ-ゼ活性の変化と相関していることを見いだしている。本研究ではPC12細胞のNGFによる分化過程のガングリオシドの動態を検討するために、ガングリオシド合成シアル酸転酵素活性の変化を経時的に調べた。PC12をNGFで48時間処理して突起の出た細胞を分化細胞(5μm以上のneurite保持細胞、17%)とし、シアル酸転移酵素の反応産物は、TLCーラジオ-トグラフィ-で標準物質の移動度と比較して確認した。GD3合成酵素については特異的モノクロ-ナル抗体によるTLCー免疫染色で確認した。(1)分化PC12細胞のGD3合成酵素(CMPシアル酸:GM3ーα2→8シアル酸転移酵素)活性は未分化細胞の約2倍であった。primed細胞であるMR31細胞にNGFを48時間処理した場合(5μm以上のneurrite保持細胞、64.7%)では約3倍となった。(2)Lactosylceramideを基質とするGM3合成酵素(α2→3)、GM1を基質とするGDla合成酵素(α2→3)、GDlaを基質とするGTla合成酵素(α2→8)、GTlbを基質とするGQlb合成酵素(α2→8)の各シアル酸転移酸素活性について調べた。GM3合成酸素およびGDla合成酵素活性は分化により2.5ー3倍となったが、GTlaとGQlb合成酸素活性は分化で変化しなかった。PC12細胞の分化に際し、ある特定のガングリオシド合成酵素が選択的に活性化されることが示唆された。(3)PC12細胞にはフコ-ス含有ガングリオシドが含まれるので、分化に伴うガングリオシド合成のフコ-ス転移酸素活性の変化と、分化及び増殖に関係のある癌遺伝子の発現について検討を行なっている。

PC12 细胞响应神经生长因子 (NGF) 形成神经突，神经节苷脂成分也会发生变化。我们之前发现，在启动分化的引发细胞中，特定神经节苷脂成分的变化较高，并且与乙酰胆碱酯酶活性的变化相关。在本研究中，为了检查神经节苷脂在 NGF 诱导的 PC12 细胞分化过程中的动态，我们检查了神经节苷脂合成唾液酸转移酶活性随时间的变化。用NGF处理PC12 48小时，分化出具有突起的细胞（5μm以上的神经突保留细胞，17%）。使用特异性单克隆抗体通过 TLC 免疫染色证实 GD3 合酶。 (1)分化的PC12细胞中的GD3合酶(CMP唾液酸：GM3-α2→8唾液酸转移酶)活性大约是未分化细胞的两倍。当作为初免细胞的MR31细胞用NGF处理48小时（5μm以上的神经突保留细胞，64.7%）时，增加了约3倍。 (2)以乳糖神经酰胺为底物的GM3合酶(α2→3)、以GM1为底物的GDla合酶(α2→3)、以GDla为底物的GTla合酶(α2→8)、以及以GTlb为底物研究了GQlb合酶(α2→8)的唾液酸转移氧活性。 GM3合成氧和GDla合酶活性随着分化增加2.5-3倍，但GTla和GQlb合成氧活性不随着分化而改变。有人提出，在 PC12 细胞分化过程中，特定的神经节苷脂合酶被选择性激活。 (3)由于PC12细胞含有含岩藻糖的神经节苷脂，我们正在研究神经节苷脂合成过程中岩藻糖转移氧活性的变化以及与分化和增殖相关的癌基因的表达。