生体系金属活性種の構造化学的研究

生物系统中金属活性物质的结构化学研究

基本信息

批准号：
03241215
负责人：
甲斐泰
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03241215/
关键词：
金属蛋白質金属酵素結晶構造銅蛋白質ヘム蛋白質結晶化

项目摘要

生体内での酵素触媒反応や電子移動には、金属が極めて重要な役割を果しており、その機能ー構造相関に関する研究は、関連分野の研究の発展に不可欠である。そこで、生体内で最も重要な金属の一つである銅に注目し、単核銅蛋白質であるシュ-ドアズリン、アズリン、アミシアニン及び複核銅蛋白質であるアスコルビン酸酸化酵素、亜硝酸還元酵素の結晶構造解析を行い、銅が果す生体内機能の構造相関を、原子のレベルで明らかにすることを目的とする研究を行った。平成3年度の具体的研究成果は次のとおりである。1)Methylobacterium extorquens AM1のシュ-ドアズリン:シンクロトロン放射光を用いた回折実験を行い、異常分散効果を利用して銅原子の位置を決定した。これを手がかりに、構造が既知のAlcaligenes faecalis Sー6を初期構造モデルとする分子置換法を行い、構造を解析した。引き続き分子動力学法による精密化を行い、最終段階に入っている。2)Achromobacter xylosoxidans NCiB11015のアズリン:脱窒菌A xylosoxidans NCiB11015を破砕、硫安分画後、CMーsephadexカラムによってアズリンがチトクロ-ムC'や亜硝酸還元酵素等とともに分離される。これまでの研究で、硫安を沈澱剤とするハンギングドロップ蒸気拡散法で針状結晶が得られていたが、X線回折実験には太さが不十分であった。新しくマクロシ-ディング法による結晶育成を試みたところ,0.2ー0.3mmの太さのものが得られたので、シンクロトロン放射光を用いて回折強度を測定した。構造が既知のAlcaligenes deritriqicansを出発構造モデルとした分子置換法により構造を解析し、分子動力学法による精密化を行っているが、現在2.5A^^○分解能デ-タを用いてRが25.1%である。3)その他、A.xylosoxidans NCiB11015のチトクロ-ムC^^'の結晶化、Rhodospirillum rubrumのチトクロ-ムC'の精密化、Streptomyces caespitosusの中性プロテア-ゼの構造解析、構造解析ラボシステムの構築などを行った。

金属在活生物体中的酶催化剂反应和电子运动中起着非常重要的作用，对其功能 - 结构相关性的研究对于相关领域的研究的发展至关重要。因此，请注意铜，这是活体中最重要的金属之一，单调铜氧化物的结晶结构，抗坏血酸氧化物，单核切碎蛋白以及进行了双核铜蛋白分析，并进行了研究为了阐明铜在原子水平上的身体功能的结构相关性。 1991年的具体研究结果如下。 1）甲基杆菌AM1 SHU-DOORZLIN：使用同步加速器辐射进行传播实验，并使用异常分散效应确定Copperhara-Giji的位置。使用此情况，使用Alcalignes粪便S -6进行了一种分子取代方法，该模型具有已知的结构为线索，并分析了结构。它继续被分子动态学术法所强调，并进入了最后阶段。 2）achromobacter xylosoxidans ncib11015的阿兹林：碎和硫，Sephadex柱，Azlin是滴虫-M C'和粘性酸还原酶等。两者都分离。在先前的研究中，通过使用硫作为沉降剂的悬挂液蒸汽扩散法获得了针头晶体，但X射线时间的厚度不足。当尝试采用新的宏观降差方法来培养晶体时，获得了0.2-0.3 mm的厚度，因此使用同步加速器辐射测量衍射强度。该结构是通过分子取代方法使用分子替代方法分析的，该分子替代方法是出发模型，该模型具有已知的结构，现在由分子动态学者尘土飞扬。 3）其他，进行了a.xylosoxidans ncib1015'和Rhodospirulum rubrum的Chitochrom C'的结晶，结构分析，结构分析系统的构建。