多面的機能を有するDNA複製終結点結合タンパク質の構造解析

具有多效性功能的DNA复制终止点结合蛋白的结构分析

基本信息

批准号：
02263210
负责人：
堀内嵩
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

大腸菌の複製終結点結合タンパク質は、染色体上にある特異的な22bpからなる終結点配列を認識、結合するだけではなく、生じた複合体がその部位において、接近する複製フォ-クの進行を阻止するという他のDNA結合タンパク質には見られない特異な活性を表す。本タンパク質が示すこの二つの活性(DNA結合活性と複製フォ-ク阻害性)がいかなるポリペプチドに担われており、どの様にしてその活性を表すかは興味あるところであり、本研究の主題である。この複製フォ-ク阻害活性は,複製フォ-クを構成する多種のタンパク質のうちDNAヘリカ-ゼ活性の阻害によることを明かにしてきたが、他のグル-プの結果と一部矛盾したこともあり、本年度はこれを再度確かめた。そのため大腸菌とは異なる系、つまり真核生物の系を用い確かめることとした。系としては、SV40DNAの試験管内複製系である。基質のSV40DNAに終結点配列を挿入し、反応液に終結点結合タンパク質を添加したところ、酵素試料として、租抽出液あるいは精製標品いずれを用いても、明らかな終結点での複製フォ-ク進行の阻害が観察された。さらに終結点とその結合タンパク質の複合体は、SV40のlargeT抗原の有するヘリカ-ゼ活性を特異的に阻害することも解った。以上のことから、大腸菌の終結システムが、真核生物の系でも同様に有効であること、複製フォ-ク進行の機構が原核、真核問わず基本的には同じであること、さらにフォ-ク阻害の標的が間違いなくDNAヘリカ-ゼそのものであることが明かとなった。以上の研究以外に,共同研究として,このタンパク質の結晶化の試みまた枯草菌の類似タンパク質の一次元構造の比較から、ドメイン構造の理論的推論を現在進めている。

大肠杆菌的重复终止点结合蛋白不仅识别并结合了由染色体上的22 bp组成的终点排列，而且还阻止了该区域中未发现的唯一活动，这是在其他区域中发生的。 DNA结合蛋白。该蛋白质表明这两种活性（DNA结合活性和重复抗议）是多肽以及它们如何代表其活性的原因。这种重复的焦点抑制活性表明，这是由于抑制性DNA旋转型固定度的各种重复焦点，但有些是与我今年再次对其进行检查的结果。因此，决定使用与大肠杆菌（即解剖系统）不同的系统确认。作为一个系统，它是SV40DNA试管中的重复系统。当末端阵列插入底物SV40DNA，并将终点结合蛋白添加到反应溶液中时，无论酶样品，税收提取物或精制项目，重复焦点都在清晰的端点处被观察到。此外，还可以理解，终点的复合物及其结合蛋白特异性抑制了SV40 Larget抗原的Helica-Zero活性。从以上，大肠杆菌的末端在真核素系统中也有效，无论核还是天然，重复的聚焦机制基本上都是相同的，而且抑制的目标是DNA Helica-Ze-Ze-Ze-Ze-Ze-Ze。本身。除了上述研究之外，作为一项联合研究，目前，该蛋白质结晶的尝试以及死者类似蛋白质的一个维结构的比较，目前正在促进域结构的理论推断。