蛋白質/DNA複合体の構造

蛋白质/DNA复合物的结构

• 批准号: 02263102
• 负责人: 箱嶋 敏雄
• 金额: $ 35.2万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02263102/
• 关键词: 蛋白質構造; DNA構造; 分子認識; 三次元構造; 高次構造; 転写制御; 塩基配列特異性; DNA結合蛋白質

塩基配列に特異的なDNA結合蛋白質として、分裂酵母のAP1様転写制御因子papl+、ヒトのインタ-フェロン関連遺伝子の転写制御因子IRF2、大腸菌の浸透圧レギュロンの転写因子OmpR、大腸菌の複製終結点結合因子Tarについて、また、DNA塩基配列には非特異的な結合蛋白質として大腸菌のクロモゾ-マル蛋白質HーNS、大腸菌の単鎖DNA結合蛋白質SSB、RNAと結合する蛋白質として大腸菌のRAS/EFーTu様蛋白質EraはDNA結合ドメインのサブクロ-ニングや大量精製を終了し結晶化の段階に至った。特に、SSBについては、結晶化に成功し、シンクロトロン放射X線を用いて分解能4A^^°までの回折デ-タを収集した。また、HーNSやEraについては微結晶や球晶の観察で結晶成長の可能性が確認された。酵母リボゾ-ムの大量精製を行い、80S粒子が安定に存在できる条件を見いだした。X線構造解析としては、好熱菌HUの高分解能(2A^^°)での構造精密化を行った。大腸菌HUと合成DNAの複合体結晶は分解能3.7A^^°でR値が29%まで構造を精密化した。イメ-ジングプレ-ト(1P)からの強度読み取り機の導入により、IPを装着した巨大ワイセンベルグ型X線カメラを用いたシンクロトロン放射X線による迅速X線回折強度デ-タ収集の効率化を計った。カイコ絹糸腺抽出液中に検出したDNA超らせん形成する因子(酸性蛋白質、50KDa)をクロ-ニングしつつあり、この因子の活性へのデキストラン硫酸などポリアニオンの効果を調べた。超らせんによる転写の律速段階であるTFIID/プロモ-タ複合体形成の促進効果を種々のプロモ-タを用いて検討し、その普遍性を確認した。大腸菌RecAのキメラ分子を数多く作成し、大きくは3つドメインをもち、中央のドメインは4つの領域に分かれることが明らかになった。

作为特异性碱序列的DNA结合蛋白，作为DNA结合蛋白，分裂酵母的类似AP1的转移因子PAPL+人类内部纤维相关基因IRF2，Escherichia ompr的渗透调节中的转录因子，Escherichia coli coli coli coli coli coli coli coli coli coli coli coli coli coli在因子焦油的情况下，重复的终点结尾是一种非特异性结合蛋白作为一种非特异性结合蛋白大肠杆菌（Escherichia Coli）是大肠杆菌的蛋白质，是一种与RNA RAS/EF-TU结合的蛋白质，蛋白质时代结束了DNA结合结构域的亚周围和质量纯化，并达到了结晶的阶段。特别是，对于SSB，我们在结晶中取得了成功，并使用Synchrotron辐射X射线收集了最高4A ^^°的衍射DE-DA。另外，通过观察微晶体和球晶体，通过观察H -NS和ERA的观察来证实晶体生长的可能性。我们进行了大量的酵母revocu-Mi纯化，发现80年代颗粒可能稳定存在的条件。对于X射线结构分析，用良好的HU的高溶液（2a ^^°）进行结构精度。大肠杆菌HU和合成DNA的复杂晶体已经解决了3.7a ^^°，R值的结构至29％是精确的。使用同步辐射X射线使用巨大的Wisenberg X射线摄像机，将IME-JING Protot（1P）的强度阅读机介绍，以测量快速X射线折叠强度-TA聚合收集的效率。 ta。在丝绸丝质提取中检测到的DNA排行因子（酸性蛋白，50KDA）被黑，并检查了聚生物（如葡萄糖硫酸）对该因子活性的影响。使用各种假设检查了TFIID/促销形成的促进效应，这是主管转录的搬迁阶段，并证实了其普遍性。它是由大肠杆菌Reca的许多嵌合体分子创建的，具有三个结构域，并且中央域分为四个区域。

项目成果

H.Ueda: "Identification and purification of a <Bombyx mori>___ー homologue of FTZーF1" <Nucle.Acids Res.>___ー. 18. 7229-7234 (1990)

H.Ueda：“<Bombyx mori>___ー FTZーF1 同源物的鉴定和纯化”<Nucle.Acids Res.>___ー 18. 7229-7234 (1990)。

M.Mizutani: "Negative supercoling of DNA facilitates an interaction between transcription factor IID and the fibroin gene promotor" <Proc.Natl.Acad.Sci>___ー.(USA). 88. (1991)

M. Mizutani：“DNA 的负超冷促进转录因子 IID 和丝心蛋白基因启动子之间的相互作用”<Proc.Natl.Acad.Sci>___.(USA)。

A.Higashitani: "ATPーIndependent strand transfer protein from murine spermatocytes,spermatids,and spermatozoa" <Experimental Cell Res.>___ー. 186. 317-323 (1990)

A. Higashitani：“来自小鼠精母细胞、精子细胞和精子的 ATP 独立链转移蛋白”<实验细胞研究>___-。

K.Katayanagi: "Threeーdimensional structure of ribonuclease H from <E.coli>___ー" <Nature>___ー. 347. 306-309 (1990)

K. Katayanagi：“来自<大肠杆菌>___的核糖核酸酶H的三维结构”<自然>___。

T.Tsukihara: "Symmetry and subunit arrengement of Tobacco necrosis virus (TNV)" <Acta Crystallogr.>___ー. B46. 855-860 (1990)

Tsukihara：“烟草坏死病毒（TNV）的对称性和亚基排列”<Acta Crystallogr.>___-B46（1990）。