染色体凝縮因子の活性化の機序に関する生化学的研究

染色体浓缩因子激活机制的生化研究

• 批准号: 02260202
• 负责人: 山下 茂
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02260202/
• 关键词: 染色体凝縮; 成熟促進因子; 細胞周期; cdc2キナ-ゼ

生理的染色体凝縮因子であるMPF(maturationーpromoting factor:成熟促進因子)の自己活性化におけるcdc2キナ-ゼの役割を解明するため、プロテインキナ-ゼ阻害薬であるKー252誘導体及びスタウロスポリンのcdc2キナ-ゼ活性に対する効果を調べた。また一部の薬物につきMPF活性とcdc2キナ-ゼ活性に対する効果の並行性について検討した。アフリカツメガエル未受精卵をβーグリセロリン酸及びEGTAを含む溶液中で破砕し、20,000g遠心上清のOー34%硫安画分をとり、このMPF活性を無細胞系で精子核の染色体凝縮を観察する方法で定量化し、ヒストンH1を基質としてcdc2キナ-ゼ活性を測定した。Kー252a、スタウロスポリンは30及び3μMのIC_<50>でMPF活性を、6及び0.9μMのIC_<50>でcdc2キナ-ゼ活性を抑制した.これは、両活性に対する阻害薬の効果がほぼ並行することを示唆する。Kー252b、KT5926は0.3及び120μMのIC_<50>でcdc2キナ-ゼ活性を抑制した。cdc2キナ-ゼ活性に対する抑制の強さは、Kー252b>スタウロスポリン>Kー252a>KT5926の順で、Cキナ-ゼ、Aキナ-ゼ、Gキナ-ゼ、ミオシン軽鎖キナ-ゼに対する阻害の強さの順序とは異なる。従って、これらの阻害薬に対する感受性のパタ-ンはcdc2キナ-ゼの特性を示すものである。今後更に研究を進め,タンパク質リン酸化に依存したMPFの活性化がみられる無細胞系にこれらのプロテインキナ-ゼ阻害薬を作用させることによりMPF活性化に対する抑制効果を調べ、上記のcdc2キナ-ゼに対する効果と比較する予定である。これにより、MPFの活性化に必要なタンパク質リン酸化に対するcdc2キナ-ゼ自身の寄与を知ることができる。

为了阐明Cdc2喹啉酶在生理染色体凝结因子自动活化中的作用（成熟促进因子），我们研究了蛋白激酶抑制剂K-252和星形孢菌素对Cdc2 Quinase活性的影响。我们还研究了某些药物对MPF活性和CDC2 Quinase活性的影响的并行性。在含有β-甘油磷酸盐和EGTA的溶液中破坏了未施用的异急子卵，并从O-34％硫酸铵分数中获取20,000 G离心的上清液，并使用无细胞活性系统量化该MPF的活性，以观察细胞的活性测量了染色体的染色体ASEREMAIS ASERERISAINS ASERERISAL ASERERAINE ASEREL ASELE和CDC2 QUIN ASEC2 QUIN，CDC2 QUIN QUIN QUIN，CDC2 QUIN，CDC2 QUIN，CDC2 QUIN，CDC2 QUIN，CDC2 QUIN，基材。 K-252A，星形孢菌素在30和3μMIC_<50>和6和0.9μmIC_<50>下抑制MPF活性，表明抑制剂对这两种活动的影响大致相似。 K-252B，KT5926用IC_ <50>为0.3和120μm抑制Cdc2 Quinase活性。抑制Cdc2 Quinase活性的强度与C Quinase，Quinase，G Quinase，肌球蛋白轻链喹啉酶的抑制顺序不同，以K-252b> staurosporine> k-252a> k-252a> kt5926。因此，对这些抑制剂的灵敏度模式表现出CDC2喹啉酶的特性。将来将进行进一步的研究，我们将通过对MPF激活取决于蛋白质磷酸化的无细胞系统来研究对MPF激活的抑制作用，并将其与上述对CDC2激酶的影响进行比较。这使我们能够了解CDC2喹酶本身对激活MPF所需的蛋白质磷酸化的贡献。

项目成果

山下 茂: "細胞周期の進行に対するプロテインキナ-ゼ阻害薬の効果" 日本薬理学雑誌. 96. 67T-67T (1990)

Shigeru Yamashita：“蛋白激酶抑制剂对细胞周期进展的影响”日本药理学杂志 96. 67T-67T (1990)。