染色体凝縮因子の活性化の機序に関する生化学的研究

染色体浓缩因子激活机制的生化研究

基本信息

  • 批准号:
    02260202
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.9万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 财政年份:
    1990
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1990 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

生理的染色体凝縮因子であるMPF(maturationーpromoting factor:成熟促進因子)の自己活性化におけるcdc2キナ-ゼの役割を解明するため、プロテインキナ-ゼ阻害薬であるKー252誘導体及びスタウロスポリンのcdc2キナ-ゼ活性に対する効果を調べた。また一部の薬物につきMPF活性とcdc2キナ-ゼ活性に対する効果の並行性について検討した。アフリカツメガエル未受精卵をβーグリセロリン酸及びEGTAを含む溶液中で破砕し、20,000g遠心上清のOー34%硫安画分をとり、このMPF活性を無細胞系で精子核の染色体凝縮を観察する方法で定量化し、ヒストンH1を基質としてcdc2キナ-ゼ活性を測定した。Kー252a、スタウロスポリンは30及び3μMのIC_<50>でMPF活性を、6及び0.9μMのIC_<50>でcdc2キナ-ゼ活性を抑制した.これは、両活性に対する阻害薬の効果がほぼ並行することを示唆する。Kー252b、KT5926は0.3及び120μMのIC_<50>でcdc2キナ-ゼ活性を抑制した。cdc2キナ-ゼ活性に対する抑制の強さは、Kー252b>スタウロスポリン>Kー252a>KT5926の順で、Cキナ-ゼ、Aキナ-ゼ、Gキナ-ゼ、ミオシン軽鎖キナ-ゼに対する阻害の強さの順序とは異なる。従って、これらの阻害薬に対する感受性のパタ-ンはcdc2キナ-ゼの特性を示すものである。今後更に研究を進め,タンパク質リン酸化に依存したMPFの活性化がみられる無細胞系にこれらのプロテインキナ-ゼ阻害薬を作用させることによりMPF活性化に対する抑制効果を調べ、上記のcdc2キナ-ゼに対する効果と比較する予定である。これにより、MPFの活性化に必要なタンパク質リン酸化に対するcdc2キナ-ゼ自身の寄与を知ることができる。
为了阐明CDC2激酶在生理性染色体浓缩因子MPF(成熟促进因子)的自动激活中的作用,我们研究了蛋白激酶抑制剂K-252衍生物和十字孢菌素我们研究了20%对CDC2激酶活性的影响。 。我们还研究了一些药物对 MPF 活性和 CDC2 激酶活性的平行影响。将未受精的非洲爪蟾卵在含有β-甘油磷酸和EGTA的溶液中破碎,将上清液中的O-34%硫酸铵级分在20,000g下离心,在无细胞系统中测量该MPF活性,以观察染色体浓缩使用组蛋白 H1 作为底物测量 CDC2 激酶活性。 K-252a和十字孢菌素在IC_<50>为30和3μM时抑制MPF活性,并在IC_<50>为6和0.9μM时抑制CDC2激酶活性,这表明抑制剂对两种活性的影响。几乎平行。 K-252b和KT5926抑制CDC2激酶活性,IC_ 50 分别为0.3和120μM。对CDC2激酶活性的抑制强度顺序为:K-252b>星形孢菌素>K-252a>KT5926:C-激酶、A-激酶、G-激酶和肌球蛋白轻链激酶。因此,对这些抑制剂的敏感性模式是 CDC2 激酶的特征。未来,我们将继续研究通过将这些蛋白激酶抑制剂应用于MPF激活依赖于蛋白质磷酸化的无细胞系统来检查对MPF激活的抑制作用,计划是比较其效果。与抗炎药相同的新药。这使我们能够了解 CDC2 激酶本身对 MPF 激活所需的蛋白质磷酸化的贡献。

项目成果

期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
山下 茂: "細胞周期の進行に対するプロテインキナ-ゼ阻害薬の効果" 日本薬理学雑誌. 96. 67T-67T (1990)
Shigeru Yamashita:“蛋白激酶抑制剂对细胞周期进展的影响”日本药理学杂志 96. 67T-67T (1990)。
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