U6RNAの触媒活性とセルフスプライシングと関する研究

U6RNA催化活性及自剪接研究

基本信息

批准号：
02238205
负责人：
谷時雄
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

U6核内低分子RNAがスプライシング反応において触媒活性を担っている可能性を検討するため以下の実験を行った。1.分裂酵母のU1、U2、U4、U5、U6RNA遺伝子をSP6プロモ-タ-の下流に連結し、SP6ポリメラ-ゼを用いてin vitroで転写した。イントロンを含むU6RNA前駆体を基質に用して、合成したRNAがスプライシング反応を触媒するか種々の条件下で検討したが、スプライシング反応は検出されなかった。2.我々は分裂酵母のU6RNA遺伝子にはmRNA型のイントロンが存在することを明らかにしている(Nature,1989)。このイントロンは、U6RNAに触媒活性があるために、別のmRNA前駆体から切り出したイントロンを取り込んで生じた可能性が最近指摘された。そこで、その可能性を検証するため、52種類の生物のU6RNA遺伝子をPCRを用いて解析し、イントロンがあるか調べた。その結果、分裂酵母以外に2種類の酵母においてU6遺伝子にmRNA型のイントロンが存在していることを明らかにした。興味深いことに、これらのイントロンが存在している領域に注目してその特徴を調べたところ、その領域は自己触媒的に切断反応を行うtabacco ring spot virus RNA[(ー)sTRSV]の触媒部位と極めて高い類以性を持つことが判明した。3.そこで、(ー)sTRSVの触媒部位と類似性を持つU6RNAの領域(約50ヌクレオチド)を合成し、GUを含む5'スプライス部位と類似した配列を持つ短いRNAをin vitroで切断できるかを解析した。その結果、分裂酵母のU6RNAの配列と全く同一の配列を持つ合成RNAには切断活性が見られなかったが、(ー)sTRSVとU6RNAの両方に相同性を持つ成合RNA(U6RNAとの相同性は78%)は、GU配列の5'側で効率よく切断することが明らかになった。これらのことは、U6RNAがスプライシング反応において、触媒活性を持つ可能性を強く示唆する。

进行了以下实验，以检查U6核低分子RNA负责剪接反应中催化剂活性的可能性。 1。分裂酵母的U1，U2，U4，U5和U6RNA基因与SP6促销的下游连接，并使用SP6 Polymer-ZE在体外转录。使用含有内含子作为底物的U6RNA前体，合成RNA会催化剪接反应或在各种条件下，但未检测到施明反应。 2。我们透露，酵母菌的U6RNA基因具有mRNA型内含子（自然，1989年）。最近有人指出，由于U6RNA的催化活性，该内含子可能已通过在另一个mRNA前体中的内含子掺入。因此，为了验证可能性，我们使用PCR分析了52种生物体的U6RNA基因，并检查了是否有内含子。结果，据揭示了mRNA型内含子在U6基因中存在于两种类型的酵母菌中，除了分裂酵母以外。有趣的是，关注这些固有的区域，并检查了该区域具有自催化的切割反应和Tabacco Ring Sporus sporus rna的催化位点[（ー）STRSV]。质量。 3。因此，可以用（大约50个核苷酸）（约50个核苷酸）（约50个核苷酸）的U6RNA面积（约50个核苷酸），并用类似于5'拆分位点（包括GU）的序列切割一个短RNA，可以在体外切割。被分析。结果，具有与U6RNA序列的序列序列完全相同的合成RNA没有任何切割活性，但是（ー）strsv和u6RNA具有同源RNA（家乡u6RNA（U6RNA（U6RNA）（U6RNA）。它。它。它。已经表明，在GU序列的5'侧有效断开了78％）。这些强烈建议U6RNA在剪接反应中具有催化活性。