U6RNAの触媒活性とセルフスプライシングと関する研究

U6RNA催化活性及自剪接研究

基本信息

批准号：
02238205
负责人：
谷時雄
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

U6核内低分子RNAがスプライシング反応において触媒活性を担っている可能性を検討するため以下の実験を行った。1.分裂酵母のU1、U2、U4、U5、U6RNA遺伝子をSP6プロモ-タ-の下流に連結し、SP6ポリメラ-ゼを用いてin vitroで転写した。イントロンを含むU6RNA前駆体を基質に用して、合成したRNAがスプライシング反応を触媒するか種々の条件下で検討したが、スプライシング反応は検出されなかった。2.我々は分裂酵母のU6RNA遺伝子にはmRNA型のイントロンが存在することを明らかにしている(Nature,1989)。このイントロンは、U6RNAに触媒活性があるために、別のmRNA前駆体から切り出したイントロンを取り込んで生じた可能性が最近指摘された。そこで、その可能性を検証するため、52種類の生物のU6RNA遺伝子をPCRを用いて解析し、イントロンがあるか調べた。その結果、分裂酵母以外に2種類の酵母においてU6遺伝子にmRNA型のイントロンが存在していることを明らかにした。興味深いことに、これらのイントロンが存在している領域に注目してその特徴を調べたところ、その領域は自己触媒的に切断反応を行うtabacco ring spot virus RNA[(ー)sTRSV]の触媒部位と極めて高い類以性を持つことが判明した。3.そこで、(ー)sTRSVの触媒部位と類似性を持つU6RNAの領域(約50ヌクレオチド)を合成し、GUを含む5'スプライス部位と類似した配列を持つ短いRNAをin vitroで切断できるかを解析した。その結果、分裂酵母のU6RNAの配列と全く同一の配列を持つ合成RNAには切断活性が見られなかったが、(ー)sTRSVとU6RNAの両方に相同性を持つ成合RNA(U6RNAとの相同性は78%)は、GU配列の5'側で効率よく切断することが明らかになった。これらのことは、U6RNAがスプライシング反応において、触媒活性を持つ可能性を強く示唆する。

进行了以下实验，以研究小U6核RNA负责剪接反应中的催化活性的可能性。 1。将SP6启动子的下游连接裂变酵母U1，U2，U4，U4和U6 RNA基因，并使用SP6聚合酶在体外转录。使用含有内含子的U6RNA前体作为底物，在各种条件下研究了合成的RNA是否会催化剪接反应，但未检测到剪接反应。 2。我们揭示了裂变酵母U6RNA基因中的mRNA型内含子的存在（自然，1989年）。最近指出，由于U6RNA的催化活性，该内含子可能是通过在另一个mRNA前体中切除的内含子来产生的。因此，为了验证这种可能性，使用PCR分析了52种生物的U6RNA基因，以确定是否存在内含子。结果，揭示了mRNA类型的内含子在U6基因中存在于两种类型的酵母菌中，除了裂变酵母。有趣的是，当我们查看这些内含子所在的区域时，我们发现该区域与执行自催化裂解反应的Tabacco Ring Spot病毒RNA [（ - ）STRSV]的催化位点非常高。 3。因此，合成了与（ - ）strsv的催化位点相似的U6RNA（约50个核苷酸）的区域，并进行了分析，以确定是否可以在体外裂解具有类似于含有GU的5'剪接位点的序列的短RNA。结果表明，在合成RNA中没有裂解活性，其序列与裂变酵母中的U6RNA完全相同，但据显示，（ - ）将RNA与STRSV和U6RNA（与U6RNA的同源性均与U6RNA同源为78％）在GU序列5'侧有效地裂解。这些强烈表明U6RNA在剪接反应中可能具有催化活性。