血液凝固・線溶調節因子の分子生物学的研究

凝血纤溶调节剂的分子生物学研究

基本信息

批准号：
01637002
负责人：
青木延雄
金额：
$ 15.36万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.線溶制波因子アルファ2プラスミンインヒビター(PI)の先天性遺伝性欠損症の遺伝子について、昨年度に解明した家系と異った他の一家系について、その変異を明らかにした。その家系のホモ接合体の解析で遺伝子に再構成や大きな欠落はみとめられず、推一の変化としてGlu137に対応する3塩基対の欠落がみとめられた。この欠落は合成ヌクレオチドをプローブとしたハイブリド形成法にて、ヘテロ接合体にもみとめられた。また、発現実験によって、変異PIが細胞内が産生されるが細胞内移送が障害され分泌されないことが本家系PI欠損症の成因であることが判明した。2.凝固線溶制御調節因子ヒスチジンリッチ糖蛋白(HRG)の主要な性質の1つであるヘパリン中和作用と機能ドメインについてキモトリプシンによる限定分解とモノクローナル抗体による競合で検討した。その結果、HRGがヘパリン中和作用を発揮するためのヘパリン結合部位はN末端領域のシスタチン様ドメイン中に存在することが明らかになった。3.凝固のプロテインCを介する制御系において補酵素的役割を果たす血管内皮蛋白トロンボモデュリン(TM)の機能ドメインの解析を行なった。cDNAを用いて、site-directed deletion mutagenesis法により、6個のEGFドメインを含む蛋白を発現させ、それらのプロテインC活性化能をしらべた結果、活性の発現に必要な最小構造はEGF4、5、6であることが認められた。4プロテインC(PC)欠損家系のPC遺伝子のエクソン3、4、5断片においてメチル化のパターンが正常のそれと異なることが見出されたが、その違いがPC発現異常に関与しているとは現段階では立証できていない。5.凝固線溶の調節因子でもあるアルファ2マクログロブリン(MG)の遺伝子プロモーターをCAT遺伝子と融合し、肝細胞にトランスフェクトし、急性期への応答をになうMG遺伝子上のシグナルの位置と配列を決定した。

1。在基因中揭示了该突变的先天性遗传性缺乏，纤溶波因子alpha2纤溶酶抑制剂（PI）与另一个家庭不同，这与我们去年揭示的那个家族不同。对该家族中纯合体的分析未显示该基因中的任何重构或主要缺失部分，并且作为硫基的变化，检测到与GLU137相对应的三个基本对。在杂交中，使用合成核苷酸作为探针也观察到了这种缺乏症。此外，表达实验表明，原始PI缺乏的起源是突变PI被细胞内产生，但细胞内转运受损和分泌。 2。肝素中和作用结构域，这是凝血纤维蛋白溶解控制调节因子组氨酸富糖蛋白（HRG）的主要特性之一，是通过胰胆蛋白胰蛋白酶和竞争与单克隆抗体的竞争来研究的。结果表明，在N末端区域的半胱氨酸蛋白酶样结构域中存在HRG肝素中和作用的肝素结合位点。 3. We analyzed the functional domain of the vascular endothelial protein thrombomodulin (TM), which plays a coenzymatic role in the regulatory system of coagulation via protein C. Using cDNA, proteins containing six EGF domains were expressed using site-directed deletion mutagenesis, and their ability to activate protein C was investigated, and it was found that the minimum structures required for expression of activity were EGF4、5和6。发现甲基化的模式与外显子3、4和5在PC基因中的正常情况不同，来自4-蛋白C（PC）缺陷型家庭，但在此阶段，尚未证明差异涉及PC表达异常。 5。α2大球蛋白（Mg）的基因启动子也是凝血纤维蛋白溶解的调节剂，与猫基因融合，转染到肝细胞中，并确定了导致急性相的MG基因上信号的位置和序列。