ジーンターゲティングマウスを用いたB細胞レパートリー形成機構の研究

利用基因打靶小鼠研究B细胞库形成机制

基本信息

批准号：
09271204
负责人：
瀧伸介
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

報告者はこれまでに、末梢における、ジーンターゲティングによってJ_H遺伝子座に挿入したV_HT15遺伝子を発現するB細胞の比率が、C57BL/6(B)マウスでは低く、BALB/c(C)で高く、単一遺伝子に支配されていることを明らかにした。本年度は、CBF1_xCマウス(半数はC型、残りはB型の形質を示す)の染色体DNAを試料として用い、SSLP(simple sequence length polymorphism)法によって、すべての染色体についての検討は終了していないものの、第7番染色体に存在する遺伝子にこの表現型との連鎖が認められている。この第7染色体の位置には、V(D)J組み換え機構に関わる遺伝子はマップされておらず、また、RAG遺伝子(第2染色体上)とこの表現型との間に連鎖は見いだされていない。また、並行して、monospecificマウス、すなわち、上記T15iマウスと、T15k鎖トランスジェニック(tg)マウスを掛け合わせ、このk鎖tgを持ち、かつT15i/+であるマウスにおいては、ほとんどすべてのB細胞がV_HT15陽性となる事を発見した。この選択の機構として、V_HT15鎖とこのk鎖のペアがポジティブに選択され、このk鎖と野生型IgHを発現するB細胞を凌駕してしまった可能性が考えられる。その場合、別の特異性を持つk鎖tg(ARL1ktgマウス)をT15i/+マウスに導入した場合にも、T15i/+、T15ktg(+)マウスと同様にV_HT15陽性B細胞へのskewingが見られた。このことから、V_HT15陽性B細胞の選択には、V_H、Vkペアリングの選択性は関わっていないようであり、むしろ、その機構としては、これらマウスではk鎖がtgとしてB細胞分化の早期から発現されており、従ってV_HT15が発現するやいなや、B細胞は表面IgMを発現し、pro/pre-B細胞の分化ステップをスキップしてしまうため、B細胞は野生型IgH発現に必要な3度のV(D)J組み換えを行う時間がなく、ほとんどすべてのB細胞が、V_HT15陽性B細胞となってしまうことが考えられる。すなわち、軽鎖の発現のタイミングは、一度だけ重鎖遺伝子の組み換えを試みて失敗した場合に、B細胞が死に至るのか、もしくは再度もう一つのアレルで組み換えを試みるのかを決定していると考えられる。

记者先前已经表明，通过基因靶向在外围区域中插入J_H基因座的B细胞的比例在C57BL/6（B）小鼠中较低，BALB/C（C）高，并由单个基因主导。今年，将CBF1_XC小鼠的染色体DNA（C的一半显示C型和其余的B型）用作样品，尽管对所有染色体的研究尚未使用SSLP（简单序列长度多态性多态性）方法完成，但第7染色体上存在的基因已链接到该材料。该染色体7的位置未映射V（d）J重组机械中涉及的任何基因，也没有发现抹布基因（在2染色体上）和该表型之间发现任何联系。同时，发现与上述T15i小鼠的小鼠中，几乎所有B细胞均为V_HT15，并且具有此K链TG和T15I/+的小鼠。 V_HT15链和此K链对可能会被积极地选择，超过表达K链和野生型IGH的B细胞。在这种情况下，当将具有不同特异性的K链TG（ARL1KTG小鼠）引入T15i/+小鼠中时，以与T15I/+和T15KTG（+）小鼠相同的方式观察到与V_HT15阳性B细胞的偏斜。因此，看来V_H和VK配对的选择性与V_HT15阳性B细胞的选择无关v（d）J野生型IGH表达所需的J重组，几乎所有B细胞都成为V_HT15阳性B细胞。换句话说，如果重链基因重新组合并失败，或者B细胞是否会死亡，或者是否再次尝试与另一个等位基因尝试重新组合，则认为轻链表达的时间是否会确定B细胞是否会死亡。