ジーンターゲティングマウスを用いたB細胞レパートリー形成機構の研究

利用基因打靶小鼠研究B细胞库形成机制

基本信息

批准号：
09271204
负责人：
瀧伸介
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

報告者はこれまでに、末梢における、ジーンターゲティングによってJ_H遺伝子座に挿入したV_HT15遺伝子を発現するB細胞の比率が、C57BL/6(B)マウスでは低く、BALB/c(C)で高く、単一遺伝子に支配されていることを明らかにした。本年度は、CBF1_xCマウス(半数はC型、残りはB型の形質を示す)の染色体DNAを試料として用い、SSLP(simple sequence length polymorphism)法によって、すべての染色体についての検討は終了していないものの、第7番染色体に存在する遺伝子にこの表現型との連鎖が認められている。この第7染色体の位置には、V(D)J組み換え機構に関わる遺伝子はマップされておらず、また、RAG遺伝子(第2染色体上)とこの表現型との間に連鎖は見いだされていない。また、並行して、monospecificマウス、すなわち、上記T15iマウスと、T15k鎖トランスジェニック(tg)マウスを掛け合わせ、このk鎖tgを持ち、かつT15i/+であるマウスにおいては、ほとんどすべてのB細胞がV_HT15陽性となる事を発見した。この選択の機構として、V_HT15鎖とこのk鎖のペアがポジティブに選択され、このk鎖と野生型IgHを発現するB細胞を凌駕してしまった可能性が考えられる。その場合、別の特異性を持つk鎖tg(ARL1ktgマウス)をT15i/+マウスに導入した場合にも、T15i/+、T15ktg(+)マウスと同様にV_HT15陽性B細胞へのskewingが見られた。このことから、V_HT15陽性B細胞の選択には、V_H、Vkペアリングの選択性は関わっていないようであり、むしろ、その機構としては、これらマウスではk鎖がtgとしてB細胞分化の早期から発現されており、従ってV_HT15が発現するやいなや、B細胞は表面IgMを発現し、pro/pre-B細胞の分化ステップをスキップしてしまうため、B細胞は野生型IgH発現に必要な3度のV(D)J組み換えを行う時間がなく、ほとんどすべてのB細胞が、V_HT15陽性B細胞となってしまうことが考えられる。すなわち、軽鎖の発現のタイミングは、一度だけ重鎖遺伝子の組み換えを試みて失敗した場合に、B細胞が死に至るのか、もしくは再度もう一つのアレルで組み換えを試みるのかを決定していると考えられる。

作者此前曾报道，通过基因打靶插入J_H位点的表达V_HT15基因的外周B细胞比例在C57BL/6（B）小鼠中较低，在BALB/c（C）小鼠中较高，且单调。据透露，它是由单个基因控制的。今年，我们以CBF1_xC小鼠（一半显示C型性状，其余显示B型性状）的染色体DNA为样本，使用SSLP（简单序列长度多态性）方法，虽然我们还没有完成研究在所有染色体中，位于 7 号染色体上的基因与该表型相关。没有涉及 V(D)J 重组机制的基因被映射到 7 号染色体上的这个位置，并且没有发现 RAG 基因（位于 2 号染色体上）与该表型之间的联系。同时，我们将单特异性小鼠（即上述 T15i 小鼠）与 T15k 链转基因（tg）小鼠杂交，在具有该 k 链 tg 且为 T15i/+ 的小鼠中，发现几乎所有 B 细胞V_HT15 为阳性。作为这种选择的机制，V_HT15链和该k链对可能被积极选择并且优于表达该k链和野生型IgH的B细胞。在这种情况下，即使将具有不同特异性的k链tg（ARL1ktg小鼠）引入T15i/+小鼠中，也观察到与T15i/+和T15ktg(+)小鼠Ta中一样偏向V_HT15阳性B细胞。由此看来，V_H和Vk配对的选择性并不参与V_HT15阳性B细胞的选择，相反，其机制是在这些小鼠中，k链从B细胞的早期起就充当了tg；因此，一旦 V_HT15 表达，B 就会出现。由于细胞表达表面 IgM 并跳过 pro/pre-B 细胞分化步骤，因此 B 细胞没有时间进行表达野生型 IgH 所需的 3 次 V(D)J 重组，因此所有 B 细胞都可能变成 V_HT15； - 阳性 B 细胞。换句话说，轻链表达的时间被认为决定了如果B细胞尝试重组重链基因一次但失败，它是否会死亡，或者是否会再次尝试与另一个等位基因重组。