アゴニストおよび張力刺激による血管内皮由来弛緩因子の生成増強機構

激动剂和张力刺激增强血管内皮源性舒张因子产生的机制

基本信息

批准号：
04263235
负责人：
加藤隆一
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ラット大動脈リングを用いた本報告者のこれまでの研究により、細菌リポ多糖(LPS)の存在では、内皮が存在することにより最大収縮反応の低下が促進されることが示された。内皮が存在すると反応低下が促進される一つの可能性としてサイトカインの関与が考えられる。LPS単独では平滑筋細胞中NO合成酵素誘導は緩除にしか起こらないと、およびLPSとサイトカインが存在すると平滑筋細胞中NO合成酵素誘導は著しく加速される可能性について実験し、上記の現象がサイトカインで説明できるか否かにつき検討したものである。〔方法〕ラット大動脈平滑筋細胞を継代培養し、TNF-α、IL-1β、LPSの組み合わせで刺激し、上清中の硝酸イオン、亜硝酸イオン(NOx)濃度をグリース法を用いて計測した。細胞培養液は低LPS濃度(<1pg/ml)の注射用蒸留水(大塚製薬)を用いて調製し、全てのガラス器具は摂氏250度で2時間乾熱滅菌し使用した。細胞培養液、添加試薬は実験前にLPS濃度を測定した。〔結果〕LPS(100ng/ml)あるいはTNF-α(5000U/ml)の単独処置では、48時間まで有意なNOx産生を示さなかった。TNF-αとLPSの同時処置では時間依存性かつLPS濃度依存在にNOx産生がみられ、N-メチルアルギニン(500μM)またはデキサメサゾン(1μM)同時添加により抑制された。一方、IL-1β(100U/ml)は単独処置で有意なNOx産生がみられ、LPS同時処置で増強作用を認めた。TNF-α、IL-1βは同時処置で相乗作用を認めた。〔考察〕培養血管平滑筋に於いては、LPS単独ではNO合成酵素誘導は48時間以内には起こらず、また、低LPS環境(<20pg/ml)でTNF-αは単独ではNOx産生能を持たず、LPSまたはIL-1β添加を必要とした。以上のことより、内皮が存在することにより血管収縮反応の低下が促進される現象には、血管におけるサイトカインおよびNO合成酵素誘導の関与が考えられた。

我们之前使用大鼠主动脉环进行的研究表明，在细菌脂多糖（LPS）存在的情况下，内皮细胞的存在会促进最大收缩反应的减少。内皮细胞的存在促进反应降低的一种可能性被认为是细胞因子的参与。我们进行的实验发现，仅 LPS 只能缓慢地诱导平滑肌细胞中的 NO 合酶，而 LPS 和细胞因子的存在可显着加速平滑肌细胞中 NO 合酶的诱导。本研究调查了细胞因子是否可以解释这一现象。 [方法]传代培养大鼠主动脉平滑肌细胞，并用TNF-α、IL-1β和LPS联合刺激，采用Griess法测定上清液中硝酸根离子和亚硝酸根离子（NOx）浓度。细胞培养基使用低LPS浓度(<1pg/ml)的注射用蒸馏水(大冢制药)配制，所有玻璃器皿在使用前于250摄氏度干热灭菌2小时。实验前测定细胞培养基和添加试剂的LPS浓度。 [结果] 单独用 LPS (100 ng/ml) 或 TNF-α (5000 U/ml) 处理长达 48 小时，并未显示出明显的 NOx 产生。同时用 TNF-α 和 LPS 处理后，观察到 NOx 的产生呈时间依赖性和 LPS 浓度依赖性，同时添加 N-甲基精氨酸 (500 μM) 或地塞米松 (1 μM) 会抑制 NOx 的产生。另一方面，当单独用IL-1β(100U/ml)处理时观察到显着的NOx产生，并且当用LPS处理时观察到增强效果。当TNF-α和IL-1β同时治疗时观察到协同作用。 [讨论] 在培养的血管平滑肌中，单独的 LPS 在 48 小时内不会诱导 NO 合酶，而单独的 TNF-α 在低 LPS 环境（<20 pg/ml）下会抑制 NOx 的产生，因此需要添加 LPS 或 IL-1β。。由此，认为内皮的存在促进血管收缩反应降低的现象与血管内细胞因子和NO合酶的诱导有关。