海馬CAI錐体細胞NMDAレセプター活性化に働く神経回路メカニズムの研究

影响海马CAI锥体细胞NMDA受体激活的神经环路机制研究

基本信息

批准号：
04246217
负责人：
玉巻伸章
金额：
$ 0.83万
依托单位：
福井医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04246217/
关键词：
NMDAレセプター海馬 CAI CA3 錐体細胞

项目摘要

海馬のスライスでよく研究されているLTPの形成錐持の研究の流れにおいて欠落した領域がある。LTPの形成にはNMDA receptorの活性化が必要であるが、いずれの実験においても、活性化のための脱分極は、人為的刺激ないしは細胞内通電によっている。生体内に於いてこの脱分極が如何にして形成されるかを調べることは、海馬の役割及び仕組みを考える上で欠くことが出来ない。具体的には、CA3錐体細胞どうしが、同期活動現象に重要な働きをする連合線維の、何個のシナプスによって結合しているかを形態学的に調べる。次にCA3錐体細胞とCA1錐体細胞が何個のシナプスで結合しているかを調べ、同期活動し得るCA3錐体細胞の数と、unitEPSPから、CA1錐体細胞に起こり得る脱分極の大きさを見積ることにあった。この目的のために、複数神経細胞を同時に違った物質で染色し、二つの神経細胞のつながりを、光顕電顕両レベルで観察する技術が必要である。Neurobiotinを単一の神経細胞に注入し、Co-DAB反応で黒色に標識する。次に複数の神経細胞にLucifer Yellowを注入し、Avidin Biotincomplexを付け、DAB反応で褐色に標識する、以上の手順によって、一個の錐体細胞からの軸索はBiocytinで黒色に標識され、他の錐体細胞は主に樹状突起がHRPで褐色に標識される。この方法で錐体細胞どうしのシナプス結合の数を確認することを試みて来た。海馬の錐体細胞の樹状突起と軸索は、スパインを介してシナプスを形成するので、光学顕微鏡レベルでは、樹状突起と軸索の接触という形では捕らえられないという問題点が、明らかになってきたが、光顕により樹状突起と軸索の近接を、各々の錐体細胞で勘定すれば、過大評価する事はあっても過少評価する事はないとおもわれるので、光顕でも一定の概算が可能と考え、現在この法方でデータを収拾中である。

关于 LTP 形成和维持的研究流中存在一个缺失的领域，该领域已在海马切片中得到了充分研究。 NMDA受体的激活是LTP形成所必需的，但在所有实验中，激活的去极化都是通过人工刺激或细胞内电流施加来实现的。在考虑海马的作用和机制时，有必要研究这种去极化在体内是如何形成的。具体来说，我们将从形态学上检查有多少关联纤维突触（在同步活动现象中发挥重要作用）连接 CA3 锥体神经元。接下来，我们研究了有多少突触连接CA3锥体细胞和CA1锥体细胞，并从单位EPSP计算出CA3锥体细胞可以同步活动的数量以及CA1锥体细胞可以发生的去极化的幅度来估计。价值。为此，我们需要一种技术，使我们能够同时用不同物质对多个神经元进行染色，并使用光学和电子显微镜水平观察两个神经元之间的连接。将神经生物素注射到单个神经元中，并通过 Co-DAB 反应标记为黑色。接下来，向多个神经元注射荧光黄，用亲和素生物素复合物标记，并用 DAB 反应标记为棕色通过上述步骤，来自一个锥体细胞的轴突被生物胞素标记为黑色，来自另一个锥体细胞的轴突被标记。锥体细胞的树突主要用 HRP 标记为棕色。我们尝试使用这种方法确认锥体神经元之间的突触连接数量。海马锥体细胞的树突和轴突通过棘形成突触，因此在光学显微镜水平上无法检测到树突和轴突之间的接触的问题已经变得清晰起来。如果对每个锥体细胞计算树突和轴突的接近程度，可能会被高估，但不会被低估，因此我们认为可以使用光学显微镜进行一定的粗略估计，我们目前正在使用这种方法收集数据。

项目成果

期刊论文数量（3）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

玉巻,伸章: "Establishement of two-cell intracellwlar labeling technigue for analysis of association fibers of the CA3-Rippocampal pyramidal neurors" Nevroscience Research Suppl. 16. 159 (1991)

Tamamaki, Nobuaki：“建立用于分析 CA3-Rippocampal 锥体神经元关联纤维的双细胞细胞内标记技术”Nevroscience Research Suppl. 16. 159 (1991)

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0
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玉巻,伸章: "Crossing fiber arrays in the rat Hippocanpus as demonstrated by three-dimensional reconstwefion" J.Comp.Newol. 303. 435-442 (1991)

Tamamaki, Nobuaki：“通过三维重构证明大鼠海马中的交叉纤维阵列”J.Comp.Newol。303. 435-442 (1991)

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通讯作者：
玉巻伸章