イネのロイシンジッパ-型DNA結合タンパク質の遺伝子構造と機能

水稻亮氨酸拉链型DNA结合蛋白的基因结构与功能

基本信息

批准号：
03262215
负责人：
草野友延
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Akita Prefectural College of Agriculture
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至 1993
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03262215/
关键词：
イネロイシンジッパ-DNA結合タンパク質低温

项目摘要

我々は,種々の環境ストレスのうち低温(5℃)がイネ植物に及ぼす影響を遺伝子発現のレベルの違いで検出しようと研究を進めてきた。独自に開発したcDNAライブラリ-作成法及びサブトラクション法〔Nucleic Acids Res.18:1071(1990),Plaut Cell Physiol.32:in press(1991)〕により低温処理で特異的に誘導される3種のイネcDNAクロ-ンの分離に成功してきた。これら3種のクロ-ンは、低温処理との関連が示唆されているアブシジン酸の処理あるいは高浸透圧(0.5Mマニト-ル)処理によっては誘導はおこらず,また熱ショク処理によっても誘導されない。更には1度低温で誘導されたものを常温25℃に戻してやると転写レベルでの誘導が全くおこっていない事も確認している。従ってこれらのクロ-ンは低温処理により特異的に発現が誘導されると結論した。これらのクロ-ンのうちLip19と命名したものは1323塩基対からなり,1次構造解析及びセンス鎖の同定などより約19,000の分子量のタンパク質をコ-ドし,その遺伝子産物はタンパク質デ-タベ-ス検索の結果トウモロコシ由来のジッパ-モチ-フをもつDNA結合タンパク質であることが明らかになっている。ゲノミックサザン法によりlip19遺伝子は1コピ-であることが判明した。λgtloの部分ライブラリ-より,ゲノミッククロ-ンを4kbのEcoRI断片として単離した。物理地図及び1次構造の解析により,lip19は翻訳領域,非翻訳領域を問わず挿入配列をもたないことが明らかとなった。現在,E.ColiのTクポリメラ-ゼ/Tクプロモ-タ-発現系で作らせたLip19を用い,DNA認識配列の同定を行っている。

我们一直在进行研究，根据基因表达水平的差异，检测各种环境胁迫中的低温（5°C）对水稻植物的影响。我们利用独创的cDNA文库构建方法和消减方法，通过低温处理特异性诱导了三个水稻品种[Nucleic Acids Res.18:1071(1990), Plaut Cell Physiol.32:in press(1991)]。 cDNA 克隆。这三个克隆不是由脱落酸处理或高渗透压(0.5M甘露醇)处理诱导的，这表明与低温处理有关，并且不是由热休克处理诱导的。此外，我们已经证实，当在1摄氏度的低温下诱导的东西回到25摄氏度的室温时，在转录水平上不会发生诱导。因此，我们得出结论，这些克隆的表达是由低温处理特异性诱导的。在这些克隆中，名为Lip19的克隆由1323个碱基对组成，根据一级结构分析和有义链鉴定，它编码一种分子量约为19,000的蛋白质，其基因产物已在蛋白质数据库中被发现。资源搜索的结果显示，它是一种源自玉米的具有拉链基序的DNA结合蛋白。基因组 Southern 分析显示，lip19 基因只有一份拷贝。从 λgtlo 部分文库中分离出一个 4kb EcoRI 片段的基因组克隆。对物理图谱和一级结构的分析表明，lip19 在翻译区或非翻译区均没有插入序列。我们目前正在使用 Lip19 鉴定 DNA 识别序列，该序列是使用大肠杆菌 T cup 聚合酶/T cup 启动子表达系统产生的。