エンドセリン変換酵素の生化学的解析と血圧調節機構の研究

内皮素转换酶生化分析及血压调节机制研究

基本信息

批准号：
03268203
负责人：
木村定雄
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)中性金属性エンドセリン変換酵素の精製と特性解析エンドセリンを産生するブタ肺を材料にして、その膜分画から、エンドセリン変換酵素を精製し、その特性解析を行った。〔結果〕2種(M1,M2)のエンドセリン変換活性をもつ酵素を検出し、いずれも膜結合型中性金属プロテア-ゼであった。M1は糖タンパク質であり、ビッグエンドセリン‐1のみを切断し、内皮由来の変換酵素とほとんど同一特性をもち、一方、M2は腎臓などに多く存在するプロテア-ゼ、neutralendopeptidase 24.11.(NEP)と非常によく似ていた。M1酵素の阻害剤として、ホスホラミドンが有効であり、その有効濃度はμuM濃度であり、NEPのnM濃度とは明かに異なっていた。以上のことから、ホスホラミドンおよびその誘導体は,一種の降圧薬となり得る可能性を示した。2)ホスホラミドンによる培養内皮細胞への効果およびラットin vivo投与の解析in vivo投与したビッグエンドセリン‐1(big ET‐1)がいかに昇圧活性を発現するかを解明するために、本研究では、臓器に蓄積した標識big ET‐1の分子型の解析、また標識big ET‐1を培養内皮細胞および平滑筋細胞と反応させたときの分子型を解析した。〔結果〕(1)静注投与した標識big‐ET‐1のET‐1への変換が実際に起こっており、体内分布で検討した腎臓を除くどの臓器(肺、肝臓、腸間膜、脾臓、心室)においても、主要ピ-クとしてET‐1を検出した。(2)培養血管内皮細胞および平滑筋細胞は培養中(細胞存在下)に、標識big ET‐1をET‐1に変換し、その変換はホスホラミドンの存在により阻害された。〔考察〕big ET‐1がin vivoで昇圧活性を持つのは、変換酵素により生成したET‐1が引き起こすと結論した。

1）中性金属内皮蛋白转换酶的纯化和表征是从膜分数中纯化内皮素转换酶，使用产生内皮素作为材料的猪肺并进行表征。 [结果]检测到具有内皮素转化活性的两种类型的酶（M1，M2），两种酶都是膜结合的中性金属蛋白酶。 M1是一种糖蛋白，仅裂解大内皮蛋白1，并且与内皮细胞转化酶的特性几乎相同，而M2与中性肽酶24.11非常相似。（NEP），一种在肾脏等中丰富的蛋白酶。磷酰胺酮作为M1酶的抑制剂有效，其有效浓度为μUM，与NM NEP的NM浓度显然不同。从以上表明，磷酰胺酮及其衍生物可能是一种降压药。 2) Effect of phosphoramidone on cultured endothelial cells and analysis of rat administration in vivo To clarify how big endothelin-1 (big ET-1) administered in vivo expresses vasive activity, this study analyzed the molecular type of labeled big ET-1 accumulated in organs, and also analyzed the molecular type when labeled big ET-1 was reacted with cultured endothelial cells and smooth muscle cells. [结果]（1）实际上已转换为ET-1的静脉注射标记的BIG-ET-1，并且除了肾脏外，ET-1在所有器官中被检测为所有器官的主要选择。（2）将培养的血管内皮细胞和平滑肌细胞转化为在培养过程中（在存在细胞的情况下）将BIG ET-1转换为ET-1，并且存在磷酰胺酮的存在抑制了转化率。 [讨论]我们得出的结论是，大ET-1的体内压力活性是由转化酶产生的ET-1引起的。