定量プロテオミクスが紐解く新規タンパク質複合体によるHPV陽性癌の新たな病因論

基于定量蛋白质组学揭示的新型蛋白质复合物的 HPV 阳性癌症的新病因学

基本信息

批准号：
22H03289
负责人：
常松貴明
金额：
$ 11.23万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2026-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H03289/
关键词：
HPV陽性癌脱ユビキチン化酵素 HPV陽性がん頭頸部癌ユビキチン化 HPV

项目摘要

ヒトパピローマウイルス(HPV)陽性扁平上皮癌は子宮頸癌と頭頸部癌にみられる特徴的な癌であり、ハイリスクHPVの感染によりウイルスタンパク質が宿主タンパクの機能阻害や新たな機能の獲得を誘導することで、発がんに至ると考えられている。しかしながら、有効な分子標的治療は未だ開発されておらず、分子標的の同定を念頭においた分子基盤の確立が急務である。研究代表者らは、これまでに脱ユビキチン化酵素に対するsiRNAライブラリを用いて、HPV陽性扁平上皮癌に致死を誘導する分子のRNAiスクリーニングを行い、MPN domain containing (MPND)を同定した。MPNDがHPVウイルスタンパク質であるE6、E7と結合し、タンパク質複合体を形成していた。本研究では最新の定量プロテオミクスを用いて、この新規タンパク質複合体の性状を解析することで、HPV陽性扁平上皮癌の新たな病因論の創出を目指した研究である。本年度は前述のように同定したMPNDの解析を進めるにあたって、市販品の抗MPND抗体を複数購入し、検討をおこなったもののいずれもMPNDの検出はできなかった。そこで、受託にて抗MPND抗体の作成を行い、現在、抗体品質の検証実験を行っている。これまでの研究結果からMPNDはHPV由来のウイルスタンパク質であるE6やE7と結合し、複合体を形成することを明らかにしている。しかしながら、この複合体を免疫沈降で検出するためには細胞可溶化液に超音波処理を行う必要があることが判明した。細胞内局在の結果と併せ、本複合体はクロマチンに結合していると推測され、研究計画当初のサイズ排除クロマトグラフィーを用いた方法のみでは複合体構成因子の同定は困難であると考えられた。

人乳头瘤病毒（HPV）阳性的鳞状细胞癌是宫颈癌和头颈癌中常见的一种特征性癌症，高危型 HPV 感染会诱导病毒蛋白抑制宿主蛋白功能并获得新的功能。癌症。然而，有效的分子靶向治疗尚未开发出来，迫切需要建立分子基础并确定分子靶点。主要研究人员此前曾使用针对去泛素酶的 siRNA 文库对可诱导 HPV 阳性鳞状细胞癌致死的分子进行 RNAi 筛选，并鉴定出含有 MPN 结构域 (MPND) 的分子。 MPND 与 HPV 病毒蛋白 E6 和 E7 结合形成蛋白复合物。在这项研究中，我们的目标是通过使用最新的定量蛋白质组学分析这种新蛋白质复合物的特性，创建 HPV 阳性鳞状细胞癌的新病因学理论。今年，为了对如上所述鉴定出的MPND进行分析，我们购买了几种市售的抗MPND抗体并对其进行了检查，但没有一种能够检测到MPND。因此，我们已经按照合同生产了抗MPND抗体，目前正在进行实验来验证抗体的质量。此前的研究结果表明，MPND 与 HPV 衍生的病毒蛋白 E6 和 E7 结合形成复合物。然而，我们发现为了通过免疫沉淀检测这种复合物，需要对细胞裂解物进行超声处理。结合细胞内定位的结果，推测该复合物与染色质结合，并且认为仅使用研究开始时使用的尺寸排阻色谱法很难鉴定复合物的构成因素计划。