認知症治療標的としてのミクログリアによるアストロサイト制御機構に剖検脳から迫る

小胶质细胞介导的星形胶质细胞控制机制作为痴呆治疗靶标的尸检研究

• 批准号: 22H02995
• 负责人: 他田 真理
• 金额: $ 11.32万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H02995/
• 关键词: CSF1R; Microglia; astrocyte; Neuropathology; microglia; ALSP; snRNA-seq; spatial gene expression; 認知症; ミクログリア; アストロサイト; CSF1R; Microglia; astrocyte; Neuropathology; microglia; ALSP; snRNA-seq; spatial gene expression; 認知症; ミクログリア; アストロサイト

本研究の特徴は、1) ALSPの患者脳の解析から見出した、恒常性ミクログリアの不足とアストロサイトの過剰反応に着想をえて、ミクログリアとアストロサイトの相互制御機構に着目した点、2) ALSP患者の剖検脳を用いて、単一核遺伝子発現解析と、10×genomics社の最新の手法であるVisium空間的遺伝子発現解析により、網羅的にRNA発現解析を行い、直接的に患者脳における遺伝子発現変化をとらえ、鍵分子を同定する点である。初年度である昨年度は、剖検脳を用いた単一核遺伝子発現解析（ALSP3例vs対象例3例）および、Visium空間的遺伝子発現解析（fresh frozenとFFPE切片を用いて、ALSP3例vs対象例3例）を行った。どちらの手法も試行前にサンプルのRIN値やDV200値を確認し、RNAの質が保たれているサンプルを用いることで、十分な質のデータを得ることができた。現在、ミクログリアについて両手法から得られたデータを統合し、空間情報を有する遺伝子発現情報としてALSPとコントロールを比較検討している。現在までのところ、ALSPにおけるミクログリアでは、疾患特異的な遺伝子発現を示す群は指摘できず、一方で、組織学的に推測されている様に恒常性ミクログリア遺伝子の発現低下が確認されている。統合により得られたデータの妥当性を検証するために、同一症例の切片を用いて免疫染色を進めており、切片上に反映された統合データの妥当性が概ね確認できている。初年度で剖検脳を用いたsnRNA-seq及びVisium空間的遺伝子発現解析の実験手法を確立できており、順調に進捗している。

这项研究的特征是1）小胶质细胞和星形胶质细胞之间的相互调控机制，这些机制在患者的大脑分析中发现了ALSP的大脑，以及2）使用ALSP患者的尸检，使用单个核基因表达分析和10xgenomics的单个核基因表达分析和10xGenomics的RNA表达方法，用于促进了基因在患者中的最新方法，并鉴定出患者的大脑表达，并鉴定出鉴定出鉴定的分量。在第一年，去年，我们使用尸检大脑进行了单个核基因表达分析（3例ALSP和3例靶向靶向病例），并使用新鲜的冷冻和FFPE部分使用森林进行了空间基因表达分析（3例ALSP与3例靶向靶向病例）。在这两种方法中，在试验前检查了样品的RIN和DV200值，并使用维持RNA质量的样品使用以获得足够的质量数据。当前，从两种方法中获得的小胶质细胞获得的数据都集成了，并在ALSP和对照中作为基因表达信息与空间信息进行了比较。迄今为止，尚未显示出迄今为止在ALSP中表现出疾病特异性基因表达的组，而稳态小胶质细胞基因表达的降低已被证实为组织学推测。为了验证通过集成获得的数据的有效性，使用同一情况的部分进行了免疫染色，并且已经确认了反射到该部分的综合数据的有效性。在第一年，我们能够建立实验方法，用于使用尸检大脑对SnRNA-Seq和visium进行空间基因表达分析，并且进步正在稳步发展。