Structural study of active center of γ-glutamyltranspeptidase and its reaction mechanism.

γ-谷氨酰转肽酶活性中心结构及其反应机制研究。

基本信息

批准号：
15580061
负责人：
SUZUKI Hideyuki
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15580061/
关键词：
glutathione γ-glutamyltranspeptidase active center Ntn-hydrolase nucleophile substrate specificity

项目摘要

γ-Glutamyltranspeptidase(GGT) utilizes both D and L-γ-glutamyl compounds as substrates. Kinetic parameters were measured using D/L-glutamine and D/L-γ-glutamyl-p-nitroanilide. Km values against D compounds were about 10 times bigger that that against L-compounds. This indicates that there are residues recognizing both amino group and carbonyl group on α carbon. The amino acid sequences of GGTs and class IV cephalosporin acylases have high similarity. Especially, residues conserved among GGTs are well conserved in class IV cephalosporin acylases. Among them, Asp-433, whose corresponding residue inhuman GGT was suggested to interact with α-amino group of γ-glutamyl compounds, was substituted with Asn since this residue is Asn in class IV cephalosporin acylases. The mutant GGT obtained GL-7-ACA acylase activity and we succeeded in converting GGT to class IV cephalosporin acylase. When the corresponding residue in Bacillus subtilis GGT was substituted with Ala, the mutant GGT lost the transpeptidation activity while hydrolysis activity was remained. Using GGT crystals, we had modeled 90% residues of E.coli GGT.

γ-谷氨酰转肽酶（GGT）利用 D 和 L-γ-谷氨酰化合物作为底物，使用 D/L-谷氨酰胺和 D/L-γ-谷氨酰-对硝基苯胺测定动力学参数。大约是L-化合物的10倍，这表明在α碳上存在识别氨基和羰基的残基。 GGT和IV类的氨基酸序列。特别是，IV类头孢菌素酰化酶中GGT间保守的残基也非常保守，其中Asp-433被取代，其在人GGT中的相应残基被认为与γ-谷氨酰化合物的α-氨基相互作用。具有Asn，因为该残基是IV类头孢菌素酰化酶中的Asn，突变体GGT获得GL-7-ACA。当枯草芽孢杆菌GGT中的相应残基被Ala取代时，突变体GGT失去了转肽活性，而水解活性仍然存在，我们利用GGT晶体模拟了90%的残基。大肠杆菌 GGT。

项目成果

期刊论文数量（39）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

A single amino acid substitution converts γ-glutamyltranspeptidase to class IV cephalosporin acylase (glutaryl-7-amino-cephalosporanic acid acylase).

单个氨基酸取代可将 γ-谷氨酰转肽酶转化为 IV 类头孢菌素酰基转移酶（戊二酰基-7-氨基-头孢菌素酸酰基转移酶）。

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Applied and Environmental Microbiology 70
影响因子：
0
作者：
W.C.Lee;T.Ohshiro;T.Matsubara;Y.Izumi;M.Tanokura;Hiromichi Minami;Hideyuki Suzuki
通讯作者：
Hideyuki Suzuki

H.Suzuki, K.Kato, H.Kumagai: "Enzymatic synthesis of γ-glutamylvaline to improve the bitter taste of valine"J.Agric.Food Chem.. 52(3). 577-580 (2004)

H.Suzuki、K.Kato、H.Kumagai：“酶促合成γ-谷氨酰缬氨酸以改善缬氨酸的苦味”J.Agric.Food Chem.. 52(3)(2004)。