シナプスにおけるエンドサイトーシス機能タンパク-膜リン脂質相互作用の解析

突触内吞功能蛋白-膜磷脂相互作用的分析

基本信息

批准号：
14380306
负责人：
絹田正裕
金额：
$ 6.85万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

Amphiphysin 1によるDynamin GTPase活性の上昇Dynamin 1GTPアーゼ活性に対するAmphiphysin 1と膜脂質の影響を調べ、Amphiphysin 1が、大型リポゾームの存在下にDynamin 1のGTPアーゼ活性を上昇することを明らかにした。リポゾームにフォスファチジルセリン、フォスファチジルイノシトール2リン酸などの酸性リン脂質を含まれる場合、特にGTPアーゼ活性の増強効果が高かった。ミュータントAmphiphysin 1を用いた解析により、Dynamin 1GTPアーゼ活性の増強には膜脂質への結合を担うBARドメインと、dynaminとの結合ドメインであるSH3ドメインが必要でであることを明らかにした。また、クラスリン結合部位、AP2結合部位を含む中間部は、Dynamin 1GTPアーゼ活性に対して抑制的に働くことが示唆された。Amphiphysin 1によるDynamin 1と膜脂質の結合の増加リポゾームを用いた結合実験により、Amphiphysin 1がDynamin 1と膜脂質の結合を増加させることを明らかにした。この結合増加の一因は、Amphiphysin 1のBARドメインとSH3ドメインを介した間接的結合によるものであることを、ミュータントAmphiphysin 1を用いた解析により明らかにした。Amphiphysin 1とDynamin 1と脂質膜の結合増加ミュータントAmphiphysin 1を用いた解析により,Amphiphysin 1とDynamin 1のリング形成にはBARドメインとSH3ドメインが必要であることを明らかにした。また、リング形成とDynamin 1 GTPアーゼ活性の上昇が、Dynamin 1と膜結合性にある程度相関することを示唆した。以上の成果を論文にまとめ発表した。

Amphiphysin 1 增加 Dynamin GTPase 活性我们研究了 Amphiphysin 1 和膜脂对 Dynamin 1 GTPase 活性的影响，发现在大脂质体存在的情况下，Amphiphysin 1 增加了 Dynamin 1 的 GTPase 活性。当脂质体含有磷脂酰丝氨酸和磷脂酰肌醇二磷酸等酸性磷脂时，增强GTP酶活性的效果特别高。使用突变体 Amphiphyrin 1 进行的分析表明，Dynamin 1GTPase 活性的增强需要 BAR 结构域（负责与膜脂结合）和 SH3 结构域（Dynamin 的结合结构域）。此外，含有网格蛋白结合位点和AP2结合位点的中间区域被认为对Dynamin 1GTPase活性具有抑制作用。 Amphiphysin 1 增加了 Dynamin 1 和膜脂之间的结合使用脂质体的结合实验表明 Amphiphysin 1 增加了 Dynamin 1 和膜脂之间的结合。使用突变体 Amphiphysin 1 进行的分析表明，这种结合增加的原因之一是通过 Amphiphysin 1 的 BAR 结构域和 SH3 结构域进行间接结合。使用 Amphiphysin 1（一种增强 Amphiphysin 1、Dynamin 1 和脂质膜之间的结合的突变体）进行的分析表明，BAR 结构域和 SH3 结构域是 Amphiphysin 1 和 Dynamin 1 之间形成环所必需的。我们还认为环的形成和 Dynamin 1 GTPase 活性的增加在某种程度上与 Dynamin 1 和膜结合相关。上述结果总结成一篇论文并发表。