マスト細胞の表現形質に対するmi転写因子異常の影響

mi转录因子异常对肥大细胞表型的影响

基本信息

批准号：
10470057
负责人：
北村幸彦
金额：
$ 9.79万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

マウスのmi遺伝子座にコードされる転写因子MITFはマスト細胞の分化に強く関係している。最初に発見されたミュータントであるmi/miマウスではbasic領域のアルギニンが1個欠失するためDNA結合能と転写活性化能を欠くmi-MITFが正常量産生されるが、mi伝子のプロモーター領域にトランス・ジンが挿入されたtg/tgマウスではMITFはまったく産生されない。我々はmi/miミュータント・マウスとtg/tgミュータント・マウスから得た培養マスト細胞で発現している遺伝子を正常(+/+)マウスの培養マスト細胞で発現している遺伝子と比較する事によりmi-MITFがどのような機能を持っているか調べることにした。各々の遺伝子型を持った培養マスト細胞からcDNAライブラリーを作製し、続いて(+/+-mi/mi)と(+/+-tg/tg)のサブトラクション・ライブラリーを作製した。予想に反して(+/+-mi/mi)サブトラクション・ライブラリーの方が(+/+-tg/tg)サブトラクション・ライブラリーよりも有意に多くのクローンを含んでいた。つまりmi-MITFが存在する場合の方がMITFが全く存在しない場合より培養マスト細胞で発現する遺伝子を減らすのである。実際+/+マスト細胞で発現していることが分かっている種々の遺伝子についてmi/mi培養マスト細胞とtg/tg培養マスト細胞で比べてみると、大部分の遺伝子ではmi/mi培養マスト細胞における発現量はtg/tg培養マスト細胞における発現量よりも多かった。以上の結果はmi-MITFの転写抑制効果を示している。さらにmi-MITFの転写抑制の機序についても研究を進め、MITF以外の蛋白との相互作用を介している事を示唆する結果を得た。相互作用の相手となる蛋白は転写しようとする遺伝子により異なる。

在小鼠的MI基因座上编码的转录因子MITF强烈参与肥大细胞分化。在第一个突变的MI/MI小鼠中，基本区域中的一种精氨酸通常是大量生产的，缺乏DNA结合和转录激活，但是在TG/TG小鼠中，在TG/TG小鼠中，在Mi-Denect的启动子区域中插入了trans-DIN，没有产生MITF。我们决定通过比较从MI/MI突变小鼠和TG/TG突变小鼠中获得的培养肥大细胞中表达的基因与在正常（+/+）小鼠的培养肥大细胞中表达的基因所获得的基因来研究MI-MITF的功能。用每种基因型从培养的肥大细胞中生成cDNA文库，然后是（+/+-Mi/Mi）和（+/+-Tg/tg）的减法库。与期望相反，（+/+-Mi/Mi）减法库包含的克隆明显高于（+/+ - TG/TG）减法库。换句话说，当存在MI-MITF时，与根本不存在MITF相比，在培养的肥大细胞中表达的基因数量减少。当比较实际上已知在 +/ +肥大细胞中表达的各种基因的MI/MI和TG/TG肥大细胞时，Mi/Mi MAST细胞中的表达水平高于大多数基因的TG/TG肥大细胞中的表达水平。以上结果显示了MI-MITF的转录抑制作用。此外，我们还研究了MI-MITF转录抑制机理的研究，并发现结果表明它是通过与MITF以外的蛋白质相互作用介导的。与所转录的基因相互作用的蛋白质不同。