マスト細胞の表現形質に対するmi転写因子異常の影響

mi转录因子异常对肥大细胞表型的影响

基本信息

批准号：
10470057
负责人：
北村幸彦
金额：
$ 9.79万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

マウスのmi遺伝子座にコードされる転写因子MITFはマスト細胞の分化に強く関係している。最初に発見されたミュータントであるmi/miマウスではbasic領域のアルギニンが1個欠失するためDNA結合能と転写活性化能を欠くmi-MITFが正常量産生されるが、mi伝子のプロモーター領域にトランス・ジンが挿入されたtg/tgマウスではMITFはまったく産生されない。我々はmi/miミュータント・マウスとtg/tgミュータント・マウスから得た培養マスト細胞で発現している遺伝子を正常(+/+)マウスの培養マスト細胞で発現している遺伝子と比較する事によりmi-MITFがどのような機能を持っているか調べることにした。各々の遺伝子型を持った培養マスト細胞からcDNAライブラリーを作製し、続いて(+/+-mi/mi)と(+/+-tg/tg)のサブトラクション・ライブラリーを作製した。予想に反して(+/+-mi/mi)サブトラクション・ライブラリーの方が(+/+-tg/tg)サブトラクション・ライブラリーよりも有意に多くのクローンを含んでいた。つまりmi-MITFが存在する場合の方がMITFが全く存在しない場合より培養マスト細胞で発現する遺伝子を減らすのである。実際+/+マスト細胞で発現していることが分かっている種々の遺伝子についてmi/mi培養マスト細胞とtg/tg培養マスト細胞で比べてみると、大部分の遺伝子ではmi/mi培養マスト細胞における発現量はtg/tg培養マスト細胞における発現量よりも多かった。以上の結果はmi-MITFの転写抑制効果を示している。さらにmi-MITFの転写抑制の機序についても研究を進め、MITF以外の蛋白との相互作用を介している事を示唆する結果を得た。相互作用の相手となる蛋白は転写しようとする遺伝子により異なる。

小鼠mi位点编码的转录因子MITF与肥大细胞分化密切相关。 mi/mi 小鼠是第一个被发现的突变体，其碱性区域缺少一个精氨酸，因此产生正常量的 mi-MITF，而 tg/tg 中根本不产生 MITF，而 mi-MITF 缺乏 DNA 结合能力。在该区域插入了转基因的小鼠。通过将mi/mi突变小鼠和tg/tg突变小鼠培养的肥大细胞中表达的基因与正常（+/+）小鼠培养的肥大细胞中表达的基因进行比较，我们决定研究mi-MITF具有什么样的功能。有。从具有每种基因型的培养肥大细胞创建cDNA文库，然后是(+/+-mi/mi)和(+/+-tg/tg)消减文库。出乎意料的是，(+/-mi/mi)消减文库比(+/-tg/tg)消减文库包含显着更多的克隆。换句话说，与根本不存在 MITF 相比，mi-MITF 的存在减少了培养的肥大细胞中表达的基因数量。事实上，当我们比较mi/mi培养的肥大细胞和tg/tg培养的肥大细胞之间已知在+/+肥大细胞中表达的各种基因时，我们发现大多数基因在mi/mi培养的肥大细胞中表达。 tg/tg培养的肥大细胞中的表达水平高于tg/tg培养的肥大细胞。上述结果证明了mi-MITF的转录抑制作用。我们还对mi-MITF的转录抑制机制进行了研究，结果表明它是通过与MITF以外的蛋白质相互作用介导的。相互作用的蛋白质根据要转录的基因而有所不同。