高血圧責任遺伝子同定への新規アプローチ：ストレス応答遺伝子と高血圧をつなぐ

识别高血压基因的新方法：将应激反应基因与高血压联系起来

基本信息

批准号：
23890115
负责人：
大原浩貴
金额：
$ 2.08万
依托单位：
Shimane University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011-08-24 至 2013-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-23890115/
关键词：
ストレス性高血圧疾患モデルコンジェニックラット

项目摘要

本研究の目的は、高血圧モデルであるSHRSPにおけるストレス性高血圧の責任遺伝子を同定することである。これまでに我々は、SHRSPと正常血圧を示すWKYの間で作成した種々のコンジェニックラットを用いた遺伝学的解析により、交感神経活性の亢進による血圧上昇に関与する遺伝子が、第1染色体に存在することを明らかにした。本研究においては、まず、ストレス性高血圧の責任遺伝子が含まれると推測される第1染色体の候補領域を、最小で約1.2Mbpの範囲まで絞り込んだ。この領域に含まれる遺伝子の総数は44個であり、このうち28個は嗅覚受容体遺伝子であった。残り16個の遺伝子のうち、遺伝子シンボルにLOCもしくはRGDを含むものを除外すると、残りは9個であり、これらを解析の優先的対象とした。次に、交感神経活性と血圧の制御中枢である吻側延髄腹外側野(RVLM)を含む脳幹部位を採取し、RNAとタンパク質を抽出した。定量的RT-PCRにより、候補領域に含まれる上記9個の遺伝子について、遺伝子発現量の比較を行った。2系統間で発現量に有意差を示す遺伝子は存在しなかった。しかし、2系統のwhole genome sequencingによって得られた塩基配列情報に基づき、小胞体膜に局在するカルシウムセンサータンパク質をコードするStim1遺伝子に、不完全長のタンパク質を生じるナンセンス変異が存在することがわかった。ウェスタンブロット法により、SHRSPの脳幹において、野生型よりも短い変異型Stim1が発現していることが確認された。WKY、SHR、SHRSPの亜系を含む計19系統のラットについてDNAシーケンシングを行い、変異型Stim1を生じる変異は、SHRSP系統に特異的に見られるSNPであることが明らかになった。

这项研究的目的是确定高血压模型SHRSP中应力诱导的高血压的负责基因。到目前为止，我们已经透露，通过使用SHRSP和WKY之间已经产生的各种先天大鼠，通过遗传分析，通过遗传分析涉及血压升高的基因，这些基因表现出正常的血压。在这项研究中，首先将染色体1的候选染色体区域含有用于应激诱发的高血压的负责基因，首先将其缩小到最低约1.2 MBP。该区域中包含的基因总数为44，其中28个是嗅觉受体基因。在其余的16个基因中，包含LOC或RGD的基因被排除为基因符号，留下了9个基因，而这些是分析的优先目标。接下来，收集了含有延髓髓质的脑干部位（RVLM），中央调节交感神经和血压，并提取RNA和蛋白质。通过定量RT-PCR比较了候选区域中包含的上述九个基因的基因表达水平。两种菌株之间的表达水平没有显着差异。然而，基于通过两条线的整个基因组测序获得的核苷酸序列信息，发现在STIM1基因中产生不完全长度蛋白的废话突变，该突变编码钙质传感器蛋白质的钙蛋白质定位于内质网状膜。蛋白质印迹证实了突变体STIM1在SHRSP的脑干中表达，比野生型短。 DNA测序是在包括WKY，SHR和SHRSP子系统在内的总共19只大鼠中进行的，并且发现产生突变体STIM1的突变是在SHRSP菌株中特别看到的SNP。