高血圧責任遺伝子同定への新規アプローチ：ストレス応答遺伝子と高血圧をつなぐ

识别高血压基因的新方法：将应激反应基因与高血压联系起来

基本信息

批准号：
23890115
负责人：
大原浩貴
金额：
$ 2.08万
依托单位：
Shimane University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011-08-24 至 2013-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-23890115/
关键词：
ストレス性高血圧疾患モデルコンジェニックラット

项目摘要

本研究の目的は、高血圧モデルであるSHRSPにおけるストレス性高血圧の責任遺伝子を同定することである。これまでに我々は、SHRSPと正常血圧を示すWKYの間で作成した種々のコンジェニックラットを用いた遺伝学的解析により、交感神経活性の亢進による血圧上昇に関与する遺伝子が、第1染色体に存在することを明らかにした。本研究においては、まず、ストレス性高血圧の責任遺伝子が含まれると推測される第1染色体の候補領域を、最小で約1.2Mbpの範囲まで絞り込んだ。この領域に含まれる遺伝子の総数は44個であり、このうち28個は嗅覚受容体遺伝子であった。残り16個の遺伝子のうち、遺伝子シンボルにLOCもしくはRGDを含むものを除外すると、残りは9個であり、これらを解析の優先的対象とした。次に、交感神経活性と血圧の制御中枢である吻側延髄腹外側野(RVLM)を含む脳幹部位を採取し、RNAとタンパク質を抽出した。定量的RT-PCRにより、候補領域に含まれる上記9個の遺伝子について、遺伝子発現量の比較を行った。2系統間で発現量に有意差を示す遺伝子は存在しなかった。しかし、2系統のwhole genome sequencingによって得られた塩基配列情報に基づき、小胞体膜に局在するカルシウムセンサータンパク質をコードするStim1遺伝子に、不完全長のタンパク質を生じるナンセンス変異が存在することがわかった。ウェスタンブロット法により、SHRSPの脳幹において、野生型よりも短い変異型Stim1が発現していることが確認された。WKY、SHR、SHRSPの亜系を含む計19系統のラットについてDNAシーケンシングを行い、変異型Stim1を生じる変異は、SHRSP系統に特異的に見られるSNPであることが明らかになった。

本研究的目的是鉴定高血压模型 SHRSP 中导致应激性高血压的基因。通过对 SHRSP 和 WKY 之间产生的血压正常的同源大鼠进行遗传分析，我们发现，由于交感神经活动增加而导致血压升高的基因位于 1 号染色体上，揭示了它的存在。在这项研究中，我们首先将 1 号染色体的候选区域缩小到大约 1.2 Mbp 的最小大小，该区域被认为包含负责应激性高血压的基因。该区域包含的基因总数为44个，其中28个为嗅觉受体基因。剩下的16个基因中，除去基因符号中含有LOC或RGD的基因，还剩下9个基因，这些基因被优先分析。接下来，收集包括交感神经活动和血压控制中心的头端腹外侧延髓（RVLM）在内的脑干区域，并提取RNA和蛋白质。通过定量RT-PCR比较候选区域中包含的9个基因的基因表达水平。两个品系之间没有表现出表达水平显着差异的基因。然而，根据两个菌株的全基因组测序获得的核苷酸序列信息，发现编码定位于内质网膜的钙传感器蛋白的Stim1基因含有无义突变，导致蛋白长度不全。塔。 Western blotting证实，比野生型短的突变型Stim1在SHRSP的脑干中表达。对包括WKY、SHR和SHRSP亚系在内的总共19个大鼠品系进行了DNA测序，发现导致Stim1突变的突变是SHRSP品系中特有的SNP。