腫瘍性骨破壊の表現型を決定する免疫学的機序

决定肿瘤性骨破坏表型的免疫机制

基本信息

批准号：
22K21058
负责人：
高畑惣介
金额：
$ 1.83万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-08-31 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K21058/
关键词：
口腔腫瘍骨破壊 IL-7 RANKL 破骨細胞 CD4

项目摘要

異なる骨吸収型を示す腫瘍におけるT細胞サブユニットの分布と比較マウスモデルの腫瘍の遺伝子量を定量的PCRを用いて比較し、Tリンパ球全体マーカーであるCD3は浸潤型骨吸収モデルにおいて多く認め、その中でもCD4陽性およびCD8陽性Tリンパ球が多く認められることが示唆された。また腫瘍内におけるCD4、CD8およびFOXP3陽性T細胞の量的比較を行うため、多重染色法を用いたマルチカラー解析を行った。CD4陽性T細胞では約７割、CD8陽性T細胞では約12％そしてFOXP3陽性T細胞では約10％のRANKL産生を認めた。その一方、いずれの細胞でも約70-90％にIL-7受容体の発現細胞を認めたが、RANKL産生との強い関係性は認められなかった。 RANKLを発現しているCD4陽性細胞が腫瘍内のどこに存在するのか検討するために、浸潤型マウスモデル腫瘍浸潤先端部の骨吸収を認める部位での組織切片（連続切片）にて蛍光二重染色、TRAP染色およびHE染色を行なった。 TRAP陽性細胞に接するような位置にCD4陽性RANKL陽性細胞を認めた。腫瘍浸潤先端部においてRANKLを発現するCD4陽性T細胞が異常な骨吸収を示す破骨細胞の分化に関与している可能性が示唆された。腫瘍でのCD4陽性リンパ球のサブセットをそれぞれの転写因子を目的遺伝子として定量的PCRを用いて発現量を比較した。Th17では低浸潤型マウスモデルにおいて高く発現する傾向が認められた。一方、Th1とTh2では高浸潤型マウスモデルで有意に高い発現を認めた。以上から腫瘍浸潤先端部にCD4陽性RANKL陽性T細胞が存在し、破骨細胞前駆細胞に作用することで異常な骨吸収を示す破骨細胞への分化を促進させており、また骨吸収に関与しているRANKL陽性CD4陽性T細胞はTh1である可能性が示唆された。

表现出不同类型骨吸收的肿瘤中 T 细胞亚基的分布和比较我们使用定量 PCR 比较了小鼠模型中肿瘤的基因含量，发现 T 淋巴细胞的全局标志物 CD3 在侵袭性骨吸收中含量丰富其中，表明观察到许多CD4阳性和CD8阳性T淋巴细胞。此外，为了定量比较肿瘤内的 CD4、CD8 和 FOXP3 阳性 T 细胞，我们使用多重染色进行了多色分析。在大约 70% 的 CD4 阳性 T 细胞、大约 12% 的 CD8 阳性 T 细胞和大约 10% 的 FOXP3 阳性 T 细胞中观察到 RANKL 产生。另一方面，大约 70-90% 的所有细胞表达 IL-7 受体，但没有观察到与 RANKL 产生的密切关系。为了研究表达RANKL的CD4阳性细胞存在于肿瘤内的位置，对侵袭性小鼠模型中肿瘤侵袭尖端骨吸收部位的组织切片（连续切片）进行双荧光染色、TRAP染色和进行HE染色。在与 TRAP 阳性细胞相邻的位置观察到 CD4 阳性 RANKL 阳性细胞。有人提出，在肿瘤侵袭尖端表达 RANKL 的 CD4 阳性 T 细胞可能参与表现出骨吸收异常的破骨细胞的分化。我们使用每种转录因子作为靶基因，使用定量 PCR 比较了肿瘤中 CD4 阳性淋巴细胞亚群的表达水平。 Th17 在低侵袭性小鼠模型中往往高度表达。另一方面，在高侵袭性小鼠模型中观察到 Th1 和 Th2 的表达显着升高。由上可知，CD4阳性的RANKL阳性T细胞存在于肿瘤侵袭的顶端，通过作用于破骨细胞前体细胞，促进向表现出骨吸收异常的破骨细胞的分化，从而参与骨吸收。这些 RANKL 阳性 CD4 阳性 T 细胞可能是 Th1。