歯周病原細菌P.gingivalisの線毛における新たな遺伝子型解析

牙周病原菌牙龈卟啉单胞菌菌毛的新基因型分析

基本信息

批准号：
22K21050
负责人：
榮宏太朗
金额：
$ 1.83万
依托单位：
Aichi Gakuin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-08-31 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

グラム陰性偏性嫌気性桿菌Porphyromonas gingivalisは歯周病の代表的な原因細菌として知られている。本菌は付着因子としてFimA及びMfa1線毛を持つ。これらの線毛は主要成分であるFimA及びMfa1タンパク質により構成されるが、その他にそれぞれ4つの微量成分FimB～FimE及びMfa2～Mfa5が含まれる。fimAはその遺伝子配列の違いによってgenotypeI～V型に分類されるが、fimA型と病原性との関連性については不明な点が多い。一方、mfa1のgenotypeについては解析が進んでいなかったが、近年我々は mfa1が53、70A及び70B型に分類されることを明らかにし、微量成分の遺伝子型解析にも着手し、mfa2～mfa5及びfimB～fimEにおいても異なる遺伝子型が存在することも報告した。本研究では、P. gingivalisの全ての線毛成分の遺伝子型分類を可能とする手法を確立すると共に、開発した方法により歯周炎患者のFimA線毛及びMfa1線毛の遺伝子型分類を試み、臨床症状との関連性を調査することを目的とした。現在までに、既報のプライマー及び新規に設計したプライマーを用いて主要成分fimA及びmfa1のPCRを実施した。新規に設計したプライマーではそれぞれのmfa1型が特異的に増幅されることが確認された。第64回歯科基礎医学会学術大会にて「Porphyromonas gingivalisのmfa1下流因子の遺伝子型解析」という題で発表を行った。(1)mfa2～mfa4は70と53型の遺伝子型に分られ、それらの遺伝子型はmfa1型と一致した。ただし、70型のサブタイプは認められなかった。(2)一方、mfa5はA～Eの遺伝子型に分類され、mfa5がタンデムに存在する株が認められた。(3)mfa1型は、ragA/ragB遺伝子型と相関する傾向が認められたが、mfa5型との相関は認められなかった。との研究結果を報告し、mfa1型とmfa2～mfa5型、およびragA/ragB型との関連性について発表した。現在、臨床サンプルを用いた研究をスタートするために倫理委員会申請等の準備をすすめている。

牙龈卟啉单胞菌是一种革兰氏阴性专性厌氧杆菌，被认为是牙周病的典型致病菌。该细菌具有 FimA 和 Mfa1 菌毛作为附着因子。这些菌毛由主要成分 FimA 和 Mfa1 蛋白组成，但还包含四种次要成分，分别为 FimB 至 FimE 和 Mfa2 至 Mfa5。 fimA根据其基因序列的差异分为基因型I至V，但关于fimA类型与致病性之间的关系还有很多未知数。另一方面，mfa1的基因型分析尚未取得进展，但近年来我们发现mfa1被分类为53型、70A型、70B型，并开始分析微量成分的基因型。 fimB 和 fimE 存在不同的基因型。在本研究中，我们建立了一种能够对牙龈卟啉单胞菌所有菌毛成分进行基因分型的方法，并尝试使用所开发的方法对牙周炎患者的 FimA 菌毛和 Mfa1 菌毛进行基因分型。本研究的目的是调查其与临床症状的关系。。到目前为止，我们已经使用先前报道的引物和新设计的引物对主要成分fimA和mfa1进行了PCR。已证实使用新设计的引物可以特异性扩增每种 mfa1 类型。在日本基础牙科医学会第64届学术会议上以“牙龈卟啉单胞菌mfa1下游因子的基因型分析”为题发表了演讲。 (1)mfa2～mfa4分为70和53个基因型，这些基因型与mfa1型一致。然而，没有观察到70型亚型。 (2)另一方面，将mfa5分类为基因型A～E，观察到mfa5串联存在的菌株。 (3)mfa1型与ragA/ragB基因型有相关性，与mfa5型无相关性。我们报告了研究结果，并介绍了 mfa1 型、mfa2 至 mfa5 型以及 ragA/ragB 型之间的关系。我们目前正在准备向伦理委员会申请，以便开始使用临床样本进行研究。