PERKを介した細胞内ストレス適応が肝細胞がん進展に及ぼす影響

PERK介导的细胞内应激适应对肝细胞癌进展的影响

• 批准号: 21K20660
• 负责人: 行本 敦
• 金额: $ 2万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-08-30 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K20660/
• 关键词: 小胞体ストレス; PERK; RMRP; アポトーシス; 酸化ストレス

がんの細胞内環境における重要な因子として小胞体ストレス（ER ストレス）がある。がん細胞ではERストレスの主要分子であるPKR like endoplasmic reticulum kinase（PERK）は活性化していることが知られている。一方、これまで研究代表者らはPERK経路においてlong noncoding RNAであるRMRPが関与することを報告してきた。RMRPはミトコンドリアや核に存在するが、その役割については不明な点も多い。今回、肝がん細胞株において小胞体ストレスをはじめとする細胞内ストレス環境下でのRMRPの役割について検討した。まず、肝がん細胞株にツニカマイシンを添加して小胞体ストレスを誘導したところ、リアルタイムRT-PCR法、ウエスタンブロット法でPERKの発現は増加しRMRPの発現が抑制された。RMRPをsiRNAによりノックダウンしたところ、ルシフェラーゼアッセイ、ウエスタンブロット法でカスパーゼ 9の活性化がみられた。一方、カスパーゼ 8の活性化はみられなかった。更に、miRNAについても検討した。RMRPと相補的な配列を有するmiR-206の発現はRMRPのノックダウン群で上昇していた。RMRPによるアポトーシス誘導にはカスパーゼ9を介した内因性経路やmicro RNAが関与していた。次に、RMRPと血管新生因子の関係について検討した。RMRPのノックダウン群ではVEGF、PDGFについてリアルタイムRT-PCR法ではRNA発現量に有意差はみられなかった。これらの結果よりRMRPの低下は内因性アポトーシスに影響し、血管新生への影響は軽微である可能性が示唆された。RMRPはがん細胞の生存に影響を与えるため、肝細胞がんにおける治療標的となる可能性がある。

内质网应激（ER应激）是癌症细胞内环境的重要因素。众所周知，PKR 类似内质网激酶 (PERK)，是负责 ER 应激的关键分子，在癌细胞中被激活。与此同时，主要研究人员之前曾报道过 RMRP（一种长非编码 RNA）参与 PERK 通路。 RMRP 存在于线粒体和细胞核中，但其作用仍不清楚。在这里，我们研究了 RMRP 在肝癌细胞系中细胞内应激环境（包括内质网应激）下的作用。首先，当将衣霉素添加到肝癌细胞系中诱导内质网应激时，实时RT-PCR和Western blotting显示PERK表达增加而RMRP表达受到抑制。当用 siRNA 敲除 RMRP 时，在荧光素酶测定和蛋白质印迹中观察到 caspase 9 的激活。另一方面，没有观察到 caspase 8 的激活。此外，我们还研究了miRNA。具有与 RMRP 互补序列的 miR-206 的表达在 RMRP 敲低组中增加。 Caspase-9 和 micro RNA 介导的内在途径参与 RMRP 诱导细胞凋亡。接下来，我们研究了 RMRP 与血管生成因子之间的关系。在RMRP敲低组中，使用实时RT-PCR观察到VEGF和PDGF的RNA表达水平没有显着差异。这些结果表明，RMRP 的降低可能会影响内源性细胞凋亡，并且对血管生成的影响很小。 RMRP 影响癌细胞的存活，可能是肝细胞癌的潜在治疗靶点。

项目成果

小胞体ストレスに関連する long noncoding RNA RMRP を介した肝細胞がんのアポトーシス誘導作用

长链非编码RNA RMRP介导内质网应激相关的肝癌细胞凋亡诱导作用

• 发表时间: 2021
• 作者: Tokushige Katsutoshi;Ikejima Kenichi;Ono Masafumi;Eguchi Yuichiro;Kamada Yoshihiro;Itoh Yoshito;Akuta Norio;Yoneda Masato;Iwasa Motoh;Yoneda Masashi;Otsuka Motoyuki;Tamaki Nobuharu;Kogiso Tomomi;Miwa Hiroto;Chayama Kazuaki;Enomoto Nobuyuki;Shimosegawa Too;行本 敦，渡辺崇夫，日浅陽一
• 通讯作者: 行本 敦，渡辺崇夫，日浅陽一

The long noncoding RNA of RMRP is repressed by ER stress and induces apoptosis in hepatocellular carcinoma

RMRP的长链非编码RNA被ER应激抑制并诱导肝细胞癌凋亡

• 发表时间: 2021
• 作者: Yukimoto Atsushi;Watanabe Takao;Okazaki Yuki;Sunago Kotaro;Nakamura Yoshiko;Yohei Koizumi;Yoshida Osamu;Tokumoto Yoshio;Hirooka Masashi;Abe Masanori;Hiasa Yoichi
• 通讯作者: Hiasa Yoichi

The Long Non-coding RNA of RMRP is repressed by PERK and induces apoptosis in hepatocellular carcinoma

RMRP长链非编码RNA被PERK抑制并诱导肝细胞癌凋亡

• 发表时间: 2021
• 作者: Yukimoto Atsushi;Watanabe Takao;Okazaki Yuki;Sunago Kotaro;Nakamura Yoshiko;Yohei Koizumi;Yoshida Osamu;Tokumoto Yoshio;Hirooka Masashi;Abe Masanori;Hiasa Yoichi
• 通讯作者: Hiasa Yoichi