IgG型抗TSH受容体自己抗体遺伝子の解析とその応用

IgG型抗TSH受体自身抗体基因分析及其应用

基本信息

批准号：
07672487
负责人：
赤水尚史
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

バセドウ病や機能低下症の一部では抗TSHレセプター抗体が発症や病態形成に直接的に関与することから、同抗体の構造や機能に関する研究は非常に重要である。最近我々は、バセドウ病及び原発性甲状腺機能低下症患者から多数のモノクローナルTSHレセプター抗体産生リンパ球をクローニングし、同リンパ球から免疫グロブリン遺伝子を単離・解析しており、同抗体の一次構造を明かにしつつある。ただし、これまでの得られたモノクローナル抗体の多くはIgMであつた。しかしながら、患者血中に存在する自己抗体の多くはほとんどIgGであるので、今回はIgG型抗体も得ることができるシステムを用いて研究を行なつた。1)抗TSH受容体抗体遺伝子の一次構造の決定:バセドウ病または甲状腺機能低下症患者の末梢血からリンパ球を分離した後、MACS法にて、IgGを表面に有するBリンパ球を濃縮精製した。次いで、EB virusでtransformする。これによつて、IgG産生型Bリンパ球のクローニングを容易にした。培養上清に対して抗TSH受容体抗体アツセイ(TBII, TSAb, TSBAb法)を行い、陽性クローンを得た。得られたTSH受容体抗体産生B細胞クローンからmRNAを抽出し、逆転写酵素にてcDNAを合成した。免疫グロブリン遺伝子に特異的なプライマーを用いて、PCR法にて重鎖と軽鎖のそれぞれの遺伝子を単離し、核酸シークエンスの解析をした。最終的には、4つのTSAb陽性クローンから免疫グロブリン遺伝子が得られた。その結果、使用されている可変遺伝子部位に限定が示唆され、体突然変異が抗体活性に重要であることが示された。2)モノクローナル抗TSHレセプター抗体の再構成とその応用:単離した免疫グロブリン遺伝子を発現ベクターに組み込んで、リコンビナント抗体作製も試みている。

对同一抗体的结构和功能的研究非常重要，因为抗-tsh受体抗体直接参与了某些巴塞多疾病的发作和病理形成以及一些功能性低温。最近，我们从同一淋巴上克隆并分析了免疫球蛋白基因，其中许多单克隆TSH受体抗体产生了巴斯甲苯和原发性甲状腺功能假设的淋巴细胞。但是，到目前为止获得的许多单克隆抗体是IgM。但是，患者血液中的大多数自身抗体主要是IgG，因此这次我们使用允许您获得IgG型抗体的系统进行了研究。 1）抗-TSH受体抗体基因的一级结构：淋巴细胞与BASA病态或甲状腺功能减退症患者的外周血分离后，MACS方法已在IgG表面浓缩并用IgG进行了精制。接下来，转化EB病毒。结果，促进了IgG产生B淋巴细胞的克隆。对培养的顶部进行了抗-TSH受体抗体ATSEI（TBII，TSAB，TSBAB方法），并获得了阳性克隆。从获得的TSH受体抗体生产B细胞克隆中提取mRNA，并与逆转录物合成cDNA。使用特殊的底漆用于免疫球蛋白基因，通过PCR方法将每个重链和光链的基因分离，并分析了核酸序列。最终，从四个TSAB阳性克隆获得了免疫球蛋白基因。结果，提出了有限的可变基因位点，表明身体突变对于抗体活性很重要。 2）单克隆抗-TSH受体抗体的重新配置及其应用：我们试图通过将分离的免疫球蛋白基因掺入表达载体中来产生重组抗体。