肺移植後の神経再生:移植肺内神経構築変化の定量形態学的解析

肺移植后的神经再生：移植肺内神经结构变化的定量形态学分析

基本信息

批准号：
05807122
负责人：
西山勝彦
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至 1995
项目状态：
已结题

项目摘要

カルボシアニン蛍光色素Dilをエチルアルコールに溶解して、左右の頚部迷走神経へ取り込ませる事による、脳内への逆行性の神経細胞の標識について、従前の逆行性色素に加えて、有用な点について、現在論文投稿中。さらに、胃、肺などの臓器に同様にして、色素の投与を行ったところ、その支配領域の脳内の神経細胞の標識に成功した。この点についても、論文作成中。肺移植モデル、除神経モデルについての検討は、平成7年の6月より開始。平成6年度後半より、臓器の神経再生にかかわる因子として塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF)に注目し、除神経臓器の内部で起こるbFGFのmRNA発現の変化をcompetitive PCR法をもちいて経時的に、定量的に把握する方法の確立を目指してきた。ラットbFGF mRNAの定量系の確立のために、A)PCRプライマーの合成;B)competitor テンプレートの作成(1)上記pTB784 plasmid DNAを制限酵素EagIとKpnIで切断の後にligation。355bpのPCRproductをうむ、組み替えテンプレートDNAを作成。(2)RAT、Mouse、Humanの3種G3PDHに共通に反応するPrimerの開発。競合PCR法のためのテンプレートDNAの作成。C)competitive PCR:組織から精製したmRNAを逆転写した後に、(3)で作成したcompetitor DNAテンプレートを適量用いて、^<32>P-CTPsとともにPCRを行う。このあとは、ゲルをエチジウムブロマイドで染色する事で、視認でおおよその濃度を検討する。bFGFの発現時期に合成bFGF;TGP-580(CS23)(武田薬品中央研究所より供与済み)を大量投与し、神経再生への影響を検討する。

除了先前的逆行染料外，我们目前还通过将乙醇中的碳酸荧光染料DIL溶解在乙醇中，并将其掺入左侧和右颈的迷走神经中，以将逆行神经元标记为大脑的有用点。此外，当对胃和肺等器官以相同的方式给予色素时，成功标记了受控区域的大脑中的神经元。我目前还在这一点上写一篇论文。肺移植和去神经模型的考虑因素始于1995年6月。自1994年下半年以来，我们一直将基本的成纤维细胞生长因子（BFGF）作为器官再生涉及的一个因素，并旨在定量地建立一种使用丹布尔语体内部使用竞争力PCR的BFGF mRNA表达的方法。为了建立大鼠BFGF mRNA的定量系统，a）PCR引物的合成； b）在用限制酶EAGI和KPNI裂解上方的PTB784质粒DNA后，创建竞争对手模板（1）连接。创建具有355bp PCR产品的重组模板DNA。（2）对三种类型的G3PDH的共同反应的底漆的开发：大鼠，小鼠和人类。创建用于竞争性PCR方法的模板DNA。 c）竞争性PCR：在从组织纯化的mRNA逆转录后，使用（3）中创建的适当量的竞争者DNA模板使用 ^<32> p-ctps进行PCR。此后，将凝胶用溴化乙锭染色，以视觉检查近似浓度。在BFGF发作期间，对大量合成BFGF; TGP-580（CS23）（由Takeda Pharmaceutical Central Research Institute提供）以检查对神经再生的影响。