肺移植後の神経再生:移植肺内神経構築変化の定量形態学的解析

肺移植后的神经再生：移植肺内神经结构变化的定量形态学分析

基本信息

批准号：
05807122
负责人：
西山勝彦
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至 1995
项目状态：
已结题

项目摘要

カルボシアニン蛍光色素Dilをエチルアルコールに溶解して、左右の頚部迷走神経へ取り込ませる事による、脳内への逆行性の神経細胞の標識について、従前の逆行性色素に加えて、有用な点について、現在論文投稿中。さらに、胃、肺などの臓器に同様にして、色素の投与を行ったところ、その支配領域の脳内の神経細胞の標識に成功した。この点についても、論文作成中。肺移植モデル、除神経モデルについての検討は、平成7年の6月より開始。平成6年度後半より、臓器の神経再生にかかわる因子として塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF)に注目し、除神経臓器の内部で起こるbFGFのmRNA発現の変化をcompetitive PCR法をもちいて経時的に、定量的に把握する方法の確立を目指してきた。ラットbFGF mRNAの定量系の確立のために、A)PCRプライマーの合成;B)competitor テンプレートの作成(1)上記pTB784 plasmid DNAを制限酵素EagIとKpnIで切断の後にligation。355bpのPCRproductをうむ、組み替えテンプレートDNAを作成。(2)RAT、Mouse、Humanの3種G3PDHに共通に反応するPrimerの開発。競合PCR法のためのテンプレートDNAの作成。C)competitive PCR:組織から精製したmRNAを逆転写した後に、(3)で作成したcompetitor DNAテンプレートを適量用いて、^<32>P-CTPsとともにPCRを行う。このあとは、ゲルをエチジウムブロマイドで染色する事で、視認でおおよその濃度を検討する。bFGFの発現時期に合成bFGF;TGP-580(CS23)(武田薬品中央研究所より供与済み)を大量投与し、神経再生への影響を検討する。

关于逆行神经元标记在大脑中的用途，除了传统的逆行染料外，还通过将碳花青荧光染料 Dil 溶解在乙醇中并将其掺入左右颈迷走神经中。此外，当他们以同样的方式将染料注入胃和肺等器官时，他们成功地标记了大脑中控制这些器官的神经细胞。我目前也在写一篇关于这一点的论文。肺移植模型和去神经模型的研究始于1995年6月。自1994年下半年以来，我们一直关注碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）作为参与器官神经再生的因子，并一直使用竞争性PCR来监测去神经器官内bFGF mRNA表达随时间的变化。一直致力于建立一种定量理解这一点的方法。为了建立大鼠bFGF mRNA的定量系统，A)PCR引物的合成；B)竞争模板的创建(1)用限制性酶EagI和KpnI切割上述pTB784质粒DNA，然后连接。创建可产生 355bp PCR 产物的重组模板 DNA。 (2) 开发对大鼠、小鼠和人类三种类型的 G3PDH 具有共同反应的引物。为竞争性 PCR 方法创建模板 DNA。 C)竞争性PCR：反转录从组织中纯化的mRNA后，使用适量(3)中创建的竞争性DNA模板与32 P-CTP一起进行PCR。此后，可以通过用溴化乙锭对凝胶进行染色来目测确定大致浓度。在bFGF表达期间将施用大量合成bFGF；TGP-580（CS23）（由武田药品中央研究所捐赠），并检查其对神经再生的影响。