リーシュマニア原虫のP-糖タンパク質の発現制御機構に関する研究

利什曼原虫P-糖蛋白表达调控机制研究

基本信息

批准号：
04670237
负责人：
片倉賢
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

リーシュマニア原虫の薬剤耐性の分子機構として、遺伝子増幅によるP‐糖タンパク質の発現の高進が、リーシュマニア症の治療薬である5価アンチモン剤やそのほかの薬剤に対する耐性株において認められている。この場合、遺伝子の増幅に先だって、転写の活性化によるmRNA量の増加が起こることが、耐性獲得の初期反応であるものと推定される。そこで、リーシュマニアのP‐糖タンパク質遺伝子の発現を誘導する物理、化学的要因について、同遺伝子(pgpA)をプローブとしたノーザン・ハイブリダイゼイション法によって検討した。まず、熱ショックの影響を調べるため、Leishmania amazonensisの前鞭毛型虫体を37‐42℃に加温したが、同遺伝子の発現の高進を認めることができなかった。次に、5価アンチモン剤であるmeglumine antimonateに同虫体を暴露したが、本法ではそのmRNAの増加を検出できなかった。これらの刺激によるP‐糖タンパク質遺伝子の発現は、一過性であることや発現量の少ないことも予想される。したがってmRNAの高感度検出法や刺激条件について、今後さらに詳細に検討することが必要であると考えられた。P‐糖タンパク質遺伝子の染色体上の位置について、パルスフィールド電気泳動法とpgpAをプローブとしたサザン・ハイブリダイゼイション法によって検討した。リーシュマニア属原虫のWHO標準株11種を含む21株について調べたところ、同遺伝子は、ほとんどの株で約700kbの大きさの一つの染色体上に存在することが判明した。しかし、エクアドルで分離したL.mexicana株においては、pgpAプローブが700kbから750kbの大きさの複数の染色体と反応したため、P‐糖タンパク質の遺伝子座が他のリーシュマニア株とは異なっている可能性が示唆された。

作为利什曼原虫耐药性的分子机制，在对用于治疗利什曼病的五价锑药物和其他药物耐药的菌株中观察到由于基因扩增导致P-糖蛋白表达增加。在这种情况下，推测由于基因扩增之前的转录激活而导致的mRNA量的增加是获得抗性的初始反应。因此，我们使用相同的基因（pgpA）作为探针，通过Northern杂交研究了诱导利什曼原虫P-糖蛋白基因表达的物理和化学因素。首先，为了检查热休克的影响，我们将亚马逊利什曼原虫前鞭毛体加热到37-42℃，但我们无法检测到该基因表达的增加。接下来，将寄生虫暴露于锑酸葡甲胺（一种五价锑剂），但该方法无法检测到其 mRNA 的增加。预期由于这些刺激而引起的P-糖蛋白基因的表达将是短暂的并且表达水平将是低的。因此，有必要对mRNA的高灵敏度检测方法和刺激条件进行更详细的研究。使用脉冲场电泳和 Southern 杂交（使用 pgpA 作为探针）研究 P-糖蛋白基因的染色体位置。他们研究了 21 个利什曼原虫菌株，其中包括 11 个 WHO 标准菌株，发现该基因存在于大多数菌株中大约 700 kb 大小的单条染色体上。然而，在厄瓜多尔分离的墨西哥利什曼原虫菌株中，pgpA 探针与大小范围为 700 kb 至 750 kb 的多个染色体发生反应，表明 P-糖蛋白位点可能与其他利什曼原虫菌株不同。