DNA-probeクロマトグラフィー分離機構の解析

DNA探针层析分离机理分析

• 批准号: 04650858
• 负责人: 山本 修一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04650858/
• 关键词: クロマトグラフィー; DNA; DNA-プローブ; 勾配溶出

2本の一本鎖DNAが2重らせん構造になる反応は塩基配列に対して非常に特異的である。この性質を利用した固相化DNA-probeは現在臨床診断用に広く利用されているエンザイムイムノアッセイ(EIA)と同様な利用方法により遺伝子の分析技術としてEIAと相補的な役割を果たすと考えられている。さらに、固相化DNA-probeは特定遺伝子DNA/RNA断片の分取にも有用である。プローブセンサーを液体クロマトグラフィー(LC)カラム固定相に固定化したDNA-probeLCは一塩基のミスマッチの検出さえも可能な高性能分離が期待でき、分取操作としても有用である。本研究では、DNA-probeLC分離機構を特にカラム内移動現象に着目して解析した。はじめに、DNA-probeLC用高性能分離充填剤として期待されている、非多孔性粒子(粒子径2.5μm)カラムの分離特性について検討した。タンパク質(牛血清アルブミン)を試料として測定した吸着量は、回分式吸着および破過曲線の測定のどちらからも、約2mg/m^2となり理論値と近い値を示した。次に、移動相のある成分を連続的に変化させる勾配溶出法における溶出曲線の形状と操作条件や試料(溶質)の物性値との関係を数値計算実験により検討した。試料ゾーンが勾配により押し縮められる現象は、無次元化した勾配の傾き、粒子径、吸着量(分配係数)の移動相組成(Cm)依存性、溶出位置での分配係数により構成される一つの無次元変数により一つの曲線で相関された。分配係数のCmは無次元勾配と溶出位置のCmの実験結果から容易に推算できるので、流速と勾配を変えたいくつかの実験から、試料とカラム固定相の相互作用についての有用な知見を得ることができる。また、このような情報から容易に分離の最適化が可能となることが示唆された。

两个单一链DNA变成双LED结构的反应对基本序列非常特异。使用此特性的固化DNA探针被认为是通过与当前广泛用于临床诊断的相同用法作为遗传分析技术的补充。此外，凝固DNA探针也可用于分布特定的基因DNA/RNA片段。 DNA-Probelc已将其固定在探针传感器上的液相色谱（LC）柱固定阶段，甚至可以被检测到单个基础不匹配，并且也可用作分布操作。在这项研究中，分析了DNA-螺旋分离机制，尤其是侧重于列中的运动现象。简介，检查了非钻孔颗粒（颗粒直径2.5μm）柱的分离特性，该柱被预期为DNA-Probelc的高性能分离剂。蛋白质的吸附量（牛肉暴风雨白蛋白）作为样品的吸附量约为2 mg/m^2，这两种编译吸附和破坏的曲线接近理论值。接下来，通过数值计算实验检查了梯度耗尽法中洗脱曲线形状之间的关系，该方法不断地改变动员阶段的分量和样品的属性值（解决方案）之间的关系。样品区被斜率推动的现象是未嵌合的斜率之一，粒子直径，转移相组成（CM）依赖性和分布系数在LUTTAL位置中。多变的。可以轻松地从CM的实验结果中估算分布系数的CM，因此一些改变了流速和梯度的实验将获得有关样品与固定阶段之间相互作用的有用知识。您可以。还建议这样的信息可以轻松优化分离。

项目成果

Shuichi Yamamoto Tomoyuki Suehisa Yuji Sano: "″Preparative separation of proteins by gradient‐ and stepwise‐chromatography:zone sharpening effect″" Chem.Eng.Commun.,. 119. 221-230 (1993)

Shuichi Yamamoto Tomoyuki Suehisa Yuji Sano：““通过梯度和逐步色谱法制备蛋白质分离：区域锐化效应””Chem.Eng.Commun., 119. 221-230 (1993)

Shuichi Yamamoto Yuji Sano: "Short‐cut method for predicting the productivity in affinity chromatography" J.Chromatogr.597. 173-179 (1992)

Shuichi Yamamoto Yuji Sano：“预测亲和色谱生产率的快捷方法”J.Chromatogr.597（1992）。