膵臓前駆細胞から膵ラ氏島前駆細胞への分化メカニズムの解明

阐明胰腺祖细胞向胰岛祖细胞的分化机制

基本信息

批准号：
14657275
负责人：
綿田裕孝
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657275/
关键词：
Activin neurogenin 3 Smad 転写因子膵ラ氏島膵臓分化発生 Neurogenin3

项目摘要

Neurogenin3(ngn3)は膵β細胞分化に必要かつ十分な転写因子である。我々は以前よりNgn3の発現調節機構を解明するため、ヒトNgn3遺伝子の5'flanking region約6kbを単離し、この領域の制御下にLacZを発現するトランスジェニックマウスを作製した。その結果この領域がngn3の膵における発現をrecaptureすることを明らかとした。今回、このプロモーターをluciferase遺伝子の上流に接続したレポーター遺伝子を用いて、アクチビン応答性のNgn3発現調節メカニズムを解明した。細胞としてAR42J-B13細胞を用いた。この細胞はActivin, HGF応答性にインスリン産生細胞へと分化することが知られているが、インスリンの発現前にNgn3の発現が認められる。従って、アクチビン応答性を調べるのに適した細胞株と考えられる。我々は詳細な分子生物学的検討の結果、Ngn3 promoter領域内にActivin応答性cis-elementを同定した。この領域はactivin無添加時にはrepressorとしてはたらくが、Activin添加によりそのrepressorの機能が解除されることを見出した。この領域をprobeに用いたEMSAの結果Activin応答性に結合が低下する蛋白を同定した。Activin応答性のDNA結合蛋白量の低下、あるいはNgn3転写活性の亢進はSmad7 (activin応答性SmadであるSmad2/3の抑制作用をもつ抑制性Smad)の強制発現においては全く影響をうけず、p38MAPKの抑制によりActivin応答性のDNA結合蛋白量の低下、あるいはNgn3転写活性の亢進作用の著しい減弱を認めた。さらなる検討により、このpathwayにはTAK1-MKK3-p38MAPKというsignal pathwayが関与していることが明らかとなった。

Neurogenin3（NGN3）是胰腺β细胞分化的必要和足够的转录因子。为了阐明NGN3表达调节的机制，我们分离了大约6 kb的人Ngn3基因，并在该区域的控制下创建了表达LACZ的转基因小鼠。结果表明，该区域重新接收了Ngn3在胰腺中的表达。在本文中，我们使用记者基因阐明了NGN3表达调节的激活素反应机制，该基因将荧光素酶基因上游的该启动子连接起来。 AR42J-B13细胞用作细胞。已知该细胞以激活素的HGF响应方式分化为产生胰岛素的细胞，但是在胰岛素表达之前观察到NGN3表达。因此，它被认为是检查激活素反应能力的合适细胞系。经过详细的分子生物学研究，我们确定了NGN3启动子区域内的激活素反应的顺式元素。当未添加激活素时，该区域充当阻遏物，但是发现通过添加激活素可以取消阻遏物的功能。该区域用于探针，并确定了与激活素反应性结合降低的蛋白质。在强迫表达SMAD7（抑制性SMAD的抑制作用SMAD2/3），激活素的抑制作用，激活素反应素反应素的SMAD和p38MAPK的抑制作用p38mapk的抑制作用中，p38mapk的抑制作用降低了p38mapk的抑制作用，p38mapk的抑制作用降低了p38mapk的量，p38mapk的抑制作用降低了p38mapk的抑制作用，但在p38mapk的抑制作用中，激活素响应性DNA结合蛋白的减少或NGN3转录活性的增加或NGN3转录活性的增加根本不受影响。 NGN3转录活性。进一步的考虑表明，该途径涉及一个称为TAK1-MKK3-P38MAPK的信号途径。