ミクロオートラジオグラフィーによる心不全時のカテコールアミンの細胞内動態の検討

使用显微放射自显影技术检查心力衰竭期间儿茶酚胺的细胞内动态

• 批准号: 14657224
• 负责人: 山崎 純一
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Toho University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657224/
• 关键词: Bio53.58ハムスター; ^<125>I-MIBG心筋シンチグラフィー; βブロッカー療法; カルベジロール; Cardiomyopathy; Bio humster; Carvedilol; ^<125>I-MIBG; オートラジオグラフィー

今期の実験目標は、前年度の予備実験の結果よりカルベジロール2mg/Kg/dayの少量をTO2ハムスターへ16週間投与した(C群)、上記経口摂取をしないTO2ハムスター(T群)および対象としてF1Bハムスター(F群)の3群において23週に下記を検討した。(1)血中の交感神経活性を示す(Adr), (Norado), (Dopa)の測定、(2)左室心筋重量/体重比,(3)病理所見より心筋総面積、総繊維化面積、心筋繊維化率を計算する。(4)各群においてクロロホルム吸入麻酔およびペントバルビタール40mg/Kgによる腹腔麻酔後、大腿静脈を確保し、^<125>I-MIBG 300μCiを経静脈的に投与した。4時間後に堵殺し、心筋においてミクロARGを行った。(1)血中のAdr, Norado, DopaのC, T, F群:Adr1.93,1.53,1,96ng/ml, Norado4.77,3.95,3.37ng/ml, Dopa0.13,0.16,0.15ng/mlとC群において軽度上昇傾向を認めた。(2)左室心筋重量/体重比のC, T, F群:^*0.48、^*0.538、^*0.351(^*P<0.01)とT群において有意な増加を認めた。(3)心筋繊維化率のC, T, F群:^*0.15、^*0.20、^*0.002(^*P<0.01)とC群において有意な繊維化の減少を認めた。(4)心臓内^<125>I-MIBG分布を観察する目的の電子顕微鏡によるARG作製するための技術的な問題を解決できないため、超薄切片による光顕ARGの検討を行った。凍結包埋用クリオスタットで3-5μm厚の超薄切片を作製し、stumpf法にて乳剤塗布済みスライドグラスに切片を作製し、(a)クロム酸、(b)ホルマリン&メタノール、(c)無固定の3種類の光顕ARGを作製して、心筋内の^<125>I-MIBG分布を観察した。、(a)乳剤銀粒子0.26μmに対して切片厚の限界が3-5μm厚のため局在は不明であった。(b)(c)乳剤によるアーチファクトが多く評価は困難であった。以上より心筋症ハムスターに対してのβブロッカーであるカルベジロールの投与は、心筋繊維化を防止することが病理所見より示された。しかし、光顕ARGによる心臓内^<125>I-MIBG分布は困難と考えられた。

本学期的实验目标是根据去年的初步实验结果，对TO2仓鼠施用少量卡维地洛（2毫克/公斤/天），持续16周（C组）。分3组进行研究； 23 周时的仓鼠（F 组）。 (1) (Adr)、(Norado)、(Dopa) 的测量，其表明血液中的交感神经活动，(2) 左心室心肌重量/体重比，(3) 病理学的总心肌面积和总纤维化面积结果，计算心肌纤维化率。 (4)各组均采用氯仿吸入麻醉、戊巴比妥40mg/Kg腹腔麻醉后，固定股静脉，静脉注射300μCi 125 I-MIBG。 4小时后，处死动物并对心肌进行微ARG检查。 (1) 血液中Adr、Norado、Dopa C、T、F群：Adr1.93、1.53、1,96ng/ml、Norado4.77、3.95、3.37ng/ml、Dopa0.13、0.16、0.15ng/ml C组则呈现小幅上升趋势。 (2)C、T、F组左心室心肌重量/体重比显着增加：T组^*0.48、^*0.538、^*0.351(^*P<0.01)。 (3)C、T、F组心肌纤维化率：^*0.15、^*0.20、^*0.002（^*P<0.01），C组纤维化程度明显降低。 (4)由于我们无法解决使用电子显微镜制作ARG以观察心内^<125>I-MIBG分布的技术问题，因此我们使用超薄切片研究光显微ARG。使用冷冻包埋低温恒温器制备厚度为 3-5 μm 的超薄切片，并使用 Stumpf 方法在乳液涂覆的载玻片上制备切片，并观察了三种类型的非固定光学显微镜 ARG 的分布。 ^<125>125I-MIBG位于心肌内。 (a) 0.26 μm 的乳剂银颗粒的切片厚度限制为 3-5 μm，因此定位不清晰。 (b)(c) 由于乳液造成的许多伪影，评估很困难。由上可知，病理学结果表明，对心肌病仓鼠给予β受体阻滞剂卡维地洛可预防心肌纤维化。然而，使用光学显微镜ARG确定心内125 I-MIBG分布被认为是困难的。