オーファン受容体リガンドの新しい高感度アッセイ法による探索

使用新的高灵敏度检测方法寻找孤儿受体配体

基本信息

批准号：
14657021
负责人：
木村定雄
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、独自のGPCRリガンドライブラリー作製と新しいアッセイ方法を導入し、新規生理活性ペプチドリガンドを探索することを目的とする。平成15年度は、(1)ゲノム構造Bankに登録されたDNA構造を用いて、1)独自のコンピューター「検索プログラム」により、ゲノム情報からG蛋白質共役受容体(GPCR)のリガンドとなる生理活性ペプチド候補を網羅的に抽出し、(2)994個の活性ペプチド候補をすべて化学合成し、(3)多数のGPCRを内在的に発現する細胞(組織)に作用させて特異的及び非特異的活性測定による新規GPCRリガンドのスクリーニングを行った。このGPCRペプチド性リガンド候補の化学合成は、生体内に微量しか存在しない生理活性ペプチドを大量に合成して、従来のGPCR刺激後の細胞内の下流シグナルを増幅するのど対照的な受容体上流の増幅を試みるものであり、強度のシグナルを生じ、精度よくGPCRリガンドを同定することが可能である(ペプチドゲノミクス解析の試み)。非特異的活性測定法として、オーファンGPCRを発現させた細胞や約20種類の種々の細胞に蛍光指示薬fura-2/AMを取り込ませ、ペプチドリガンド候補による細胞内Ca濃度変化を蛍光細胞内Caシグナル測定装置により96個同時に測定した.また、血管平滑筋、輸精管、回腸平滑筋などの組織をマグヌス管法にて種々の濃度のペプチドの収縮・弛緩を測定した。その結果、ゲノム構造から予測したリガンド候補994個の合成ペプチドより、総計34種類の既知ペプチドを検出した。一方、新規活性ペプチド3種類を検出した。現在、その新規活性ペプチドの遺伝子を取得し、生体内組織分布の解析および機能解析を行っている。

这项研究的目的是创建一个独特的GPCR配体库并引入一种新的测定方法，并探索新的生理活性肽剂。在2003年，（1）使用基因组结构库中注册的DNA结构，1）原始计算机“搜索程序”，这是从基因组信息中成为G-蛋白质Co -Controller（GPCR）的配体的生理肽。候选者是全面提取的，（2）所有994个活性肽都是化学合成的，（3）大量的GPCR在 - 房屋，特异性和非特异性活性的细胞（组织）上作用。。该GPCR肽配体候选者的化学成分具有大量的生理活性肽，在活体中只有少量的生理活性肽，并且在常规GPCR刺激后放大了细胞中的下游信号，这是一种尝试放大的尝试，会产生A强信号，并且可以准确识别GPCR配体（肽基因组学分析的尝试）。作为一种非特异性活性测量方法，将荧光药物fura-2/am进口到表达孤立的GPCR和约20种细胞的细胞中，并通过荧光素中的肽和候选物进行了细胞内Ca浓度变化。信号测量装置。此外，通过激光管测量的组织，例如血管平滑肌肉，聚焦管和样肌肉，以测量各种浓度的各种浓度的收缩和放松。结果，从基因组结构预测的994种合成肽中总共检测到了34个已知的肽。另一方面，检测到三个新活跃的肽。目前，获得了新的活性肽的基因，分析和分析生物组织分布和功能分析。

项目成果

期刊论文数量（4）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Takanami-Ohnishi Y, Amano S, Kimura S, Asada S, Utani A, Maruyama M, Osada H, Tsunoda H, Irukayama-Tomobe Y, Goto K, Karin M, Sudo T, Kasuya Y: "Essential role of p38 mitogen-activated protein kinase in contact hypersensitivity"J. Biol. Chem.. 277. 37896-

Takanami-Ohnishi Y、Amano S、Kimura S、Asada S、Utani A、Maruyama M、Osada H、Tsunoda H、Irukayama-Tomobe Y、Goto K、Karin M、Sudo T、Kasuya Y：“p38 丝裂原的重要作用-

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Sato M, Moroi K, Nishiyama M, Zhou J, Usui H, Kasuya Y, Fukuda, M, Kohara, Y, Komuro, I, Kimura, S: "Characterization of a novel C. elegans RGS protein with a C2 domain-Evidence for interaction between C2 domain and Galfaq subunit-"Life Sciences. (印刷中). (

Sato M，Moroi K，Nishiyama M，Zhou J，Usui H，Kasuya Y，Fukuda，M，Kohara，Y，Komuro，I，Kimura，S：“具有 C2 结构域的新型秀丽隐杆线虫 RGS 蛋白的表征 - 证据用于 C2 结构域和 Galfaq 亚基之间的相互作用 -“生命科学。（正在出版）。