オーファン受容体リガンドの新しい高感度アッセイ法による探索

使用新的高灵敏度检测方法寻找孤儿受体配体

基本信息

批准号：
14657021
负责人：
木村定雄
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、独自のGPCRリガンドライブラリー作製と新しいアッセイ方法を導入し、新規生理活性ペプチドリガンドを探索することを目的とする。平成15年度は、(1)ゲノム構造Bankに登録されたDNA構造を用いて、1)独自のコンピューター「検索プログラム」により、ゲノム情報からG蛋白質共役受容体(GPCR)のリガンドとなる生理活性ペプチド候補を網羅的に抽出し、(2)994個の活性ペプチド候補をすべて化学合成し、(3)多数のGPCRを内在的に発現する細胞(組織)に作用させて特異的及び非特異的活性測定による新規GPCRリガンドのスクリーニングを行った。このGPCRペプチド性リガンド候補の化学合成は、生体内に微量しか存在しない生理活性ペプチドを大量に合成して、従来のGPCR刺激後の細胞内の下流シグナルを増幅するのど対照的な受容体上流の増幅を試みるものであり、強度のシグナルを生じ、精度よくGPCRリガンドを同定することが可能である(ペプチドゲノミクス解析の試み)。非特異的活性測定法として、オーファンGPCRを発現させた細胞や約20種類の種々の細胞に蛍光指示薬fura-2/AMを取り込ませ、ペプチドリガンド候補による細胞内Ca濃度変化を蛍光細胞内Caシグナル測定装置により96個同時に測定した.また、血管平滑筋、輸精管、回腸平滑筋などの組織をマグヌス管法にて種々の濃度のペプチドの収縮・弛緩を測定した。その結果、ゲノム構造から予測したリガンド候補994個の合成ペプチドより、総計34種類の既知ペプチドを検出した。一方、新規活性ペプチド3種類を検出した。現在、その新規活性ペプチドの遺伝子を取得し、生体内組織分布の解析および機能解析を行っている。

这项研究旨在开发专有的GPCR配体库，并引入新的测定方法来探索新型的生物活性肽配体。在2003年，（1）使用在基因组结构库中注册的DNA结构，1）全面提取生物活性肽候选物，这些肽将作为G蛋白偶联受体（GPCR）作为G蛋白偶联受体（GPCR）的配体从基因组信息中从基因组信息中使用，并使用独特的计算机“搜索程序”，“搜索程序”，“（2）对所有994 Active tementing tements Cheminths sexthers Cheminths sexthers Cheminthe sexthers和3），以及（2）3），（2）3和3），（2）3和3）。非特异性活性通过作用在固有地表达大量GPCR的细胞（组织）上。 The chemical synthesis of this candidate GPCR peptide ligand involves amplifying the receptor upstream, which is a mass of bioactive peptides that are only present in vivo, and attempting to amplify the downstream signal in the cell after conventional GPCR stimulation, resulting in a signal of intensity and is capable of accurately identifying GPCR ligands (attempts for peptide genomics analysis).作为非特异性活性测量，将表达孤儿GPCR和约20个不同细胞的细胞与荧光指示剂Fura-2/am合并，并使用荧光细胞内CA信号测量器进行测量，同时测量了由于候选肽配体而导致的细胞内Ca浓度的96个变化。此外，使用Magnus Tube方法测量了血管平滑肌，VAS延迟和回肠平滑肌等组织，以测量各种浓度的肽的收缩和松弛。结果，从994种合成肽中总共检测到34个已知肽，这些肽可以是从基因组结构中预测的配体。另一方面，检测到三个新的活性肽。当前，获取了新型活性肽的基因，并在体内进行组织分布的分析，并进行了功能分析。

项目成果

期刊论文数量（4）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Takanami-Ohnishi Y, Amano S, Kimura S, Asada S, Utani A, Maruyama M, Osada H, Tsunoda H, Irukayama-Tomobe Y, Goto K, Karin M, Sudo T, Kasuya Y: "Essential role of p38 mitogen-activated protein kinase in contact hypersensitivity"J. Biol. Chem.. 277. 37896-

Takanami-Ohnishi Y、Amano S、Kimura S、Asada S、Utani A、Maruyama M、Osada H、Tsunoda H、Irukayama-Tomobe Y、Goto K、Karin M、Sudo T、Kasuya Y：“p38 丝裂原的重要作用-

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Sato M, Moroi K, Nishiyama M, Zhou J, Usui H, Kasuya Y, Fukuda, M, Kohara, Y, Komuro, I, Kimura, S: "Characterization of a novel C. elegans RGS protein with a C2 domain-Evidence for interaction between C2 domain and Galfaq subunit-"Life Sciences. (印刷中). (

Sato M，Moroi K，Nishiyama M，Zhou J，Usui H，Kasuya Y，Fukuda，M，Kohara，Y，Komuro，I，Kimura，S：“具有 C2 结构域的新型秀丽隐杆线虫 RGS 蛋白的表征 - 证据用于 C2 结构域和 Galfaq 亚基之间的相互作用 -“生命科学。（正在出版）。