果実肥大機構解明のための単一柔細胞内での糖代謝関連遺伝子の発現解析の可能性

对单个薄壁细胞内糖代谢相关基因进行表达分析以阐明果实膨大机制的可能性

基本信息

批准号：
14656013
负责人：
米森敬三
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度も昨年度同様、単一柔細胞からの細胞液採取方法を確立することを主たる目的として実験を行った。まず、カキ果実でヘタ片除去処理によって果実肥大を抑制することによって、果実の単一柔細胞中で誘導される糖組成の変化を再調査した。その結果、昨年度の結果同様、単一柔細胞の細胞液中の糖組成が変化し、還元糖含量が有意に減少し、全糖含量に占めるショ糖の割合が増加していることを確認した。さらに、本年度は様々の果実を用いて、それらの果実での単一細胞からの細胞液採取が可能であるかどうかを調査した。すなわち、ニホンナシ‘二十世紀'、リンゴ‘フジ'、モモ‘あかつき'および‘清水白桃'を収穫期に採取し、単一柔細胞からの細胞液の採取し、その糖含量を顕微鏡での酵素反応を用いた蛍光分析により、また、その浸透圧をピコリッターオズモメーターにより測定することを試みた。その結果、それぞれの樹種において細胞液の採取が可能であり、また、その糖含量および浸透圧を測定することが可能であることが明らかとなった。さらに、ニホンナシ‘二十世紀'とリンゴ‘フジ'から採取した細胞液については、その無機成分をSEMに装着したX線分析装置を用いることで測定することを試み、細胞液中のカリウム含量の測定が可能であることが明らかとなった。以上、マイクロマニピュレーターを用いた単一柔細胞からの細胞液採取およびその糖含量、浸透圧、無機成分などの分析は様々な樹種において可能であることが明らかとなったが、当初目的とした、単一柔細胞から採取した細胞液を用いてのmRNA分析による遺伝子発現の解析については非常に困難であり、発表出来るだけのデータを得ることが出来なかった。ただ、これまで本研究で得られた単一柔細胞から採取した細胞液の糖分析等のデータに関しては現在学会誌への投稿を準備中である。

与去年一样，我们进行了一个实验，其主要目的是建立一种从单个小儿细胞收集细胞液的方法。首先，我们通过去除牡蛎果实中的十六进制片段来抑制果实的肿大，通过抑制果实的肿瘤来重新审查果实中糖成分的变化。结果，与去年的结果一样，单个实质细胞的细胞液中的糖成分发生了变化，从而显着降低了糖含量，并且蔗糖在总糖含量中的比例增加了。此外，今年使用各种水果来研究这些水果中单个细胞中的细胞液收集是否可能。换句话说，在收获季节收集了日本梨“二十世纪”，苹果“富吉”，桃子“ akatsuki”和“ shimizu White Peach”，从单个实质细胞中收集细胞液，并尝试使用酶促反应在液体反应下通过酶促反应来测量糖含量，并使用酶促的摄入量使用摄入量，并使用渗透压量来测量糖含量。结果，已经发现可以在每个树种中收集细胞液，并且可以测量其糖含量和渗透压。此外，发现从日本梨“ 20世纪”和Apple'Fuji'收集的细胞液试图通过使用配备有SEM的X射线分析仪来测量其无机成分，并且可以测量细胞液中的钾含量。已经揭示了，在各种树种中，使用微型手持剂从单个实质细胞中收集细胞液并分析其糖含量，渗透压，无机成分等。但是，使用从单端细胞中收集的单个障碍细胞收集的mRNA分析对基因表达进行分析的初始目的是极其困难的，并且无法获得足够的数据来获得足够的数据。但是，目前正在准备提交《学术杂志》杂志上，诸如从本研究中获得的单个实质细胞收集的细胞液的糖分析等数据。