果実肥大機構解明のための単一柔細胞内での糖代謝関連遺伝子の発現解析の可能性

对单个薄壁细胞内糖代谢相关基因进行表达分析以阐明果实膨大机制的可能性

基本信息

批准号：
14656013
负责人：
米森敬三
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度も昨年度同様、単一柔細胞からの細胞液採取方法を確立することを主たる目的として実験を行った。まず、カキ果実でヘタ片除去処理によって果実肥大を抑制することによって、果実の単一柔細胞中で誘導される糖組成の変化を再調査した。その結果、昨年度の結果同様、単一柔細胞の細胞液中の糖組成が変化し、還元糖含量が有意に減少し、全糖含量に占めるショ糖の割合が増加していることを確認した。さらに、本年度は様々の果実を用いて、それらの果実での単一細胞からの細胞液採取が可能であるかどうかを調査した。すなわち、ニホンナシ‘二十世紀'、リンゴ‘フジ'、モモ‘あかつき'および‘清水白桃'を収穫期に採取し、単一柔細胞からの細胞液の採取し、その糖含量を顕微鏡での酵素反応を用いた蛍光分析により、また、その浸透圧をピコリッターオズモメーターにより測定することを試みた。その結果、それぞれの樹種において細胞液の採取が可能であり、また、その糖含量および浸透圧を測定することが可能であることが明らかとなった。さらに、ニホンナシ‘二十世紀'とリンゴ‘フジ'から採取した細胞液については、その無機成分をSEMに装着したX線分析装置を用いることで測定することを試み、細胞液中のカリウム含量の測定が可能であることが明らかとなった。以上、マイクロマニピュレーターを用いた単一柔細胞からの細胞液採取およびその糖含量、浸透圧、無機成分などの分析は様々な樹種において可能であることが明らかとなったが、当初目的とした、単一柔細胞から採取した細胞液を用いてのmRNA分析による遺伝子発現の解析については非常に困難であり、発表出来るだけのデータを得ることが出来なかった。ただ、これまで本研究で得られた単一柔細胞から採取した細胞液の糖分析等のデータに関しては現在学会誌への投稿を準備中である。

今年和去年一样，我们进行了实验，主要目的是建立一种从单个薄壁细胞中收集细胞液的方法。首先，我们重新检查了通过去除花萼抑制果实膨大而引起的柿子果实单个薄壁细胞中糖组成的变化。结果与去年的结果类似，证实单个薄壁细胞细胞液中的糖成分发生了变化，还原糖含量显着降低，蔗糖占总糖含量的比例增加.此外，今年我们还研究了是否可以使用各种水果从单个细胞中收集细胞液。即，在收获期间收集日本梨“二精”、苹果“富士”、桃“晓”和“清水白斗”，收集单个薄壁组织细胞的细胞液，并使用酶显微镜测量糖含量我们尝试通过使用反应的荧光分析和使用皮升渗透压计来测量渗透压。结果表明，可以从每个树种收集细胞液并测量其糖含量和渗透压。此外，我们尝试使用附有SEM的X射线分析仪来测量从日本梨“二精”和苹果“富士”中采集的细胞液中的无机成分，结果表明测量是可能的。如上所述，已经清楚的是，可以使用显微操作器从单个薄壁细胞收集细胞液，并通过mRNA分析来分析其糖含量、渗透压、无机成分等，并分析基因表达。使用从单个薄壁细胞收集的细胞液非常困难，我们无法获得足够的数据来呈现。然而，我们目前正准备将本研究中获得的数据（例如从单个薄壁细胞收集的细胞液的糖分析）提交给学术期刊。