糸状菌の菌糸先端成長におけるキチン合成酵素遺伝子群の機能分担の解析

丝状真菌菌丝尖端生长中几丁质合酶基因的功能划分分析

基本信息

批准号：
07660095
负责人：
堀内裕之
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07660095/
关键词：
Aspergillus キチン合成酵素分生子形成先端生長

项目摘要

A.nidulansのchsC、chsD遺伝子破壊株を作製しその表現型を検討したところ野生株と差が見られなかった。そこでChsA、chsC、chsDの各種二重遺伝子破壊株を作製した。その結果、chsCとchsDの二重遺伝子破壊株の表現型は野生株と変化が見られなかったが、chsAとchsDの二重遺伝子破壊株では分生子の形成効率が野生株の10%程度まで減少した。また、chsAとchsCの二重遺伝子破壊株では菌糸の密度が野生株に比べて粗になりまた分生子の形成効率が野生株の0.002%程度まで低下した。これらのことから、chsA遺伝子産物、chsC遺伝子産物は菌糸生長に関与することが推定された。またその遺伝子破壊株の性質より菌糸の先端生長に機能を持つことが明らかなchsBについてA.nidulansにおいて培地の炭素源の種類により発現制御可能なアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子(alcA)のプロモーターの下流に連結した。これをA.nidulansに形質転換し分生子形成期に遺伝子の発現を抑制したところ、単位面積たりの分生子数が野生株の半分程度になった。このことからchsBの遺伝子産物は菌糸の先端生長のみならず分生子の形成にも関与していることが明らかになった。さらにchsA、chsBのプロモーターにE.coliのlacZをつないで発現を検討したところchsAは菌糸ではほとんど発現がみられず分生子形成におけるメトレとフィアライデで強く発現がみられchsBは菌糸でも発現しているがメトレとフィアライデで更に強く発現していることが明らかになった。

当产生A. nidulans CHSC和CHSD基因破坏菌株并检查其表型时，没有发现与野生菌株存在差异。因此，准备了各种双基因破坏CHSA，CHSC和CHSD的菌株。结果，CHSC和CHSD的双基因菌株的表型显示出野生基因中断的菌株没有变化，但是在CHSA和CHSD的双基因中断菌株中，分生孢子形成的效率降低到野生式破坏菌株的约10％。此外，在CHSA和CHSC的双基因破坏菌株中，与野生应变相比，菌丝密度至关重要，并且分生孢子形成的效率降低至野生应变的0.002％。从这些结果中可以估计，CHSA基因产物和CHSC基因产物参与菌丝体的生长。此外，CHSB从基因干扰菌株的性质中可以明显看出，在菌丝体的尖端生长中起作用，与酒精脱氢酶基因（ALCA）的启动子的下游相连，这可以由培养基中的碳源类型表达。将其转化为nidulans，并在分生孢子形成阶段抑制基因的表达，并且分生孢子的单位面积和数量约为野生菌株的一半。这表明，CHSB的基因产物不仅参与了菌丝体的尖端生长，而且还参与了分生孢子的形成。此外，当我们通过将大肠杆菌的lacz连接到CHSA和CHSB的启动子来研究表达时，据揭示了CHSA在菌丝中几乎没有表达，但在分生孢子形成中得到了强烈表达，并且在菌丝中也表达了CHSB，但在菌丝中更强。