糸状菌の菌糸先端成長におけるキチン合成酵素遺伝子群の機能分担の解析

丝状真菌菌丝尖端生长中几丁质合酶基因的功能划分分析

基本信息

批准号：
07660095
负责人：
堀内裕之
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07660095/
关键词：
Aspergillus キチン合成酵素分生子形成先端生長

项目摘要

A.nidulansのchsC、chsD遺伝子破壊株を作製しその表現型を検討したところ野生株と差が見られなかった。そこでChsA、chsC、chsDの各種二重遺伝子破壊株を作製した。その結果、chsCとchsDの二重遺伝子破壊株の表現型は野生株と変化が見られなかったが、chsAとchsDの二重遺伝子破壊株では分生子の形成効率が野生株の10%程度まで減少した。また、chsAとchsCの二重遺伝子破壊株では菌糸の密度が野生株に比べて粗になりまた分生子の形成効率が野生株の0.002%程度まで低下した。これらのことから、chsA遺伝子産物、chsC遺伝子産物は菌糸生長に関与することが推定された。またその遺伝子破壊株の性質より菌糸の先端生長に機能を持つことが明らかなchsBについてA.nidulansにおいて培地の炭素源の種類により発現制御可能なアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子(alcA)のプロモーターの下流に連結した。これをA.nidulansに形質転換し分生子形成期に遺伝子の発現を抑制したところ、単位面積たりの分生子数が野生株の半分程度になった。このことからchsBの遺伝子産物は菌糸の先端生長のみならず分生子の形成にも関与していることが明らかになった。さらにchsA、chsBのプロモーターにE.coliのlacZをつないで発現を検討したところchsAは菌糸ではほとんど発現がみられず分生子形成におけるメトレとフィアライデで強く発現がみられchsBは菌糸でも発現しているがメトレとフィアライデで更に強く発現していることが明らかになった。

当我们创建 chsC 和 chsD 基因破坏的构巢曲霉菌株并检查它们的表型时，我们发现与野生菌株没有差异。因此，我们创建了ChsA、chsC和chsD的各种双基因破坏菌株。结果，chsC和chsD双基因破坏菌株的表型与野生型没有差异，但chsA和chsD双基因破坏菌株的分生孢子形成效率比野生菌株降低了约10％。另外，在chsA和chsC双基因破坏菌株中，菌丝密度变得比野生菌株粗，分生孢子形成效率降低至野生菌株的0.002%左右。从这些结果推断chsA基因产物和chsC基因产物参与菌丝生长。此外，我们将 chsB（根据基因破坏菌株的特性，已知其在菌丝尖端生长中具有功能）连接到乙醇脱氢酶基因 (alcA) 启动子的下游，该基因的表达可以根据关于构巢曲霉培养基中碳源的类型。当将其转化入构巢曲霉并在分生孢子阶段抑制基因表达时，每单位面积的分生孢子数量约为野生菌株的一半。这些结果表明chsB基因产物不仅参与菌丝尖端生长而且参与分生孢子形成。此外，当我们通过连接chsA和chsB启动子来检查大肠杆菌lacZ的表达时，chsA在菌丝中几乎不表达，但在分生孢子形成期间在米和瓶中强烈表达，并且chsB也在菌丝中表达。据透露，这一点在 Meter 和 Fiaraide 中表达得更为强烈。