エンドトキシンショックの抑制機構に関する分子生物学的研究

内毒素休克抑制机制的分子生物学研究

• 批准号: 05670263
• 负责人: 松浦 基博
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670263/
• 关键词: エンドトキシンショック; 細菌内毒素; エンドトキシントレランス; リポ多糖(LPS); 合成リピドA類縁化合物; 腫瘍壊死因子(TNF)

グラム陰性菌による敗血症に際しては、その細胞壁構成成分であるエンドトキシン(LPS)の遊離に伴ってショックの誘発が危惧される。このショックの誘発にはLPS刺激によって活性化されるマクロファージ(Mphi)から放出されるモノカイン類、特に腫瘍壊死因子(TNF)、の関与が大きいことが明らかになって来ている。エンドトキシンショックの動物実験モデル系(マウスを使用)で、前もって少量のLPSを投与されたマウスはLPS刺激に対する応答性を低下させ、その後、ショックの誘発に十分量のLPSで攻撃してもショックを起こして死亡することが少なくなる。LPS自身は毒性が強く少量の前投与にも問題が残るが、LPSの活性中心であるリピドAの構造類縁化合物の中に、毒性は示さないがこの様なショックの抑制効果は発揮できる化合物を数種類見出している。本研究では、Mphiの培養系を用い、細胞レベルでもTNF産生に対する抑制効果を発現できることを示し、その際、細胞レベルでの刺激伝達系にどの様な変化が生じているかについて検討した。TNF産生抑制効果を発揮できる化合物は、mRNAの産生段階で既に抑制を掛けていること、LPSの刺激伝達系に関与している可能性の高いタンパク質リン酸化反応の幾つか(代表的な65kDa及び58kDaタンパク質などのリン酸化)にも抑制を掛けていることを見出した。また、Mphi細胞へのLPSの特異的結合に関しても現在研究が進行中であるが、この結合に関しては抑制を掛けていないことを示唆する結果が出つつある。これらの結果を考え合わせると、リピドA類縁化合物で前処理されたMphiのLPS刺激に対する応答性低下機構としては、LPS結合部位(あるいは受容体)の数の減少によるものではなく、Mphi細胞表面へLPSが結合した後の情報伝達系の初期の段階で抑制が掛るため、その後の情報伝達系タンパク質リン酸化反応を経てmRNAの産生へと刺激伝達が流れて行かない機構が存在している可能性が示唆された。

在革兰氏阴性菌引起的脓毒症中，人们担心由于细胞壁成分内毒素（LPS）的释放可能引起休克。已经清楚的是，由 LPS 刺激激活的巨噬细胞 (Mphi) 释放的单核因子，尤其是肿瘤坏死因子 (TNF)，在很大程度上参与了这种休克的诱导。在内毒素休克的动物实验模型系统（使用小鼠）中，预先给予少量脂多糖的小鼠对脂多糖刺激的反应性降低，即使随后用足够量的脂多糖激发以诱导休克，他们无法产生休克，醒来和死亡的情况较少。 LPS本身具有剧毒，即使少量预先给药也会出现问题，但在作为LPS活性中心的脂质A的结构相关化合物中，有一种化合物无毒，但可以发挥抑制作用。我发现了几种类型。在本研究中，我们使用Mphi培养系统来证明对TNF产生的抑制作用甚至可以在细胞水平上表达，并且当时，我们研究了细胞水平上的刺激传递系统发生了哪些变化。能够抑制TNF产生的化合物是那些已经抑制了mRNA产生阶段的化合物，以及一些可能参与LPS刺激转导系统的蛋白质磷酸化反应（典型的65kDa和58kDa蛋白质的磷酸化也被抑制）。压制。此外，目前正在进行有关 LPS 与 Mphi 细胞特异性结合的研究，但正在出现的结果表明这种结合并未受到抑制。综合这些结果，我们认为，用脂质 A 相关化合物预处理的 Mphi 对 LPS 刺激的反应性降低的机制不是由于 LPS 结合位点（或受体）数量的减少，而是由于Mphi 对 Mphi 细胞表面 LPS 刺激的反应性 由于 LPS 结合后信号转导系统在早期受到抑制，因此可能存在刺激传递不通过 Mphi 细胞传递至 mRNA 产生的机制。建议进行后续的信号转导蛋白磷酸化反应。

项目成果

M.Matsuura: "Multistep regulation mechanisms for toleranse induction to lipcpclysaccharide Lethality in the tumor-necrosis-factor-d-mediated pathway." European Journal of Biochemistry. 220(in press). (1994)

M.Matsuura：“肿瘤坏死因子 d 介导途径中脂多糖致死性耐受酶诱导的多步调节机制。”