LECラットを用いたヒトWilson病 病因遺伝子のクローニング

利用 LEC 大鼠克隆人类威尔逊病致病基因

• 批准号: 05670151
• 负责人: 中林 啓記
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670151/
• 关键词: ウイルソン病; LECラット; 連鎖解析; RB遺伝子

LECラット病因遺伝子に連鎖する遺伝子を検討するために、まずヒトウイルソン病病因遺伝子が染色体13番の長腕14.3に位置し13q14.1-14.2のエステラーゼ(Es)Dや13q14.3の癌抑制遺伝子RBと連鎖することに着目した。LECラットの病因遺伝子もまた、ラットエステラーゼやRB遺伝子に連鎖している可能性が考えられることより、F344、PVGとLECラットとの戻し交配ラットを作製し検討を行った。ラットエステラーゼ18種のうち12種の遺伝子は19番染色体リンケージグループVに存在する。その代表例Es-1,2,10について検討したが、連鎖は見られなかった。残りのエステラーゼのうち、Es-6は8番染色体に存在するが、やはり連鎖は見られなかった。Es-12は染色体座位はわかっていないが、マウスエステラーゼ14との相同性からやはり8番染色体に存在する可能性があった。Es-12はF344との戻し交配ラットで組換え率27.8%で連鎖する可能性がのこされた。更に8番染色体にある3つのリンケージグループA,B,CについてPCRマーカー遺伝子を用いて検討した。Es-6の存在するリンケージグループBのTPMマーカーではやはり連鎖は見られず、またリンケージグループCに存在するPKATAマーカーでも連鎖は見られなかった。Es-12自身もTPMマーカー、PKATAマーカーとは連鎖が認められなかった。RB遺伝子との連鎖解析については、まずラットRBcDNAをPCR法を用いて単離し4432塩基の配列を決定した。ヒトのRBのゲノムの構造を参考にイントロン及び3′-非翻訳領域を中心にPCRを行い、多型を検索した。その結果3′-非翻訳領域に遺伝子マーカーとなりうる3ケ所の鎖長多型を見いだした。この多型を用いて戻し交配ラットを検索した結果、病因遺伝子とRB遺伝子との連鎖の可能性は、極めて少ないことがわかった。以上の結果より、LEC疾患遺伝子は、ヒトの染色体13q14.3領域と異なる遺伝子連鎖形式を有するものと考えられる。現在ヒトウイルソンの病責任遺伝子と考えられるWNDの塩基情報をもとにラットWND遺伝子の単離を試みている。

为了检查与LEC大鼠致病基因连锁的基因，我们首先确定人类威尔逊病致病基因位于13号染色体长臂14.3，酯酶（Es）D位于13q14.1-14.2，肿瘤我们重点关注 13q14.3 上的抑制基因与 RB 的联系。由于认为LEC大鼠的致病基因也可能与大鼠酯酶和RB基因有关，因此我们将F344和PVG与LEC大鼠回交，并进行了研究。 18 个大鼠酯酶基因中有 12 个位于 19 号染色体连锁群 V 上。对 Es-1、Es-2 和 Es-10 等代表性实例进行了研究，但没有观察到关联。在其余的酯酶中，Es-6 存在于 8 号染色体上，但同样没有观察到连锁。尽管Es-12的染色体位置未知，但由于其与小鼠酯酶14同源，它很可能存在于8号染色体上。在与F344回交的大鼠中，Es-12显示出连锁的可能性，重组率为27.8%。此外，使用 PCR 标记基因研究了 8 号染色体上的三个连锁群 A、B 和 C。在存在 Es-6 的连锁群 B 中未观察到与 TPM 标记的连锁，并且在存在连锁群 C 的情况下未观察到与 PKATA 标记的连锁。未发现 Es-12 本身与 TPM 标记或 PKATA 标记相关。为了与RB基因进行连锁分析，首先使用PCR方法分离大鼠RB cDNA并确定4432个碱基的序列。以人类RB基因组结构为参考，针对内含子和3'非翻译区进行PCR，寻找多态性。结果，我们在 3'-非翻译区发现了三个链长多态性，可以作为遗传标记。利用该多态性搜索回交大鼠的结果发现，致病基因与RB基因连锁的可能性极低。基于以上结果，认为LEC疾病基因与人类染色体13q14.3区域具有不同的遗传连锁模式。我们目前正在尝试根据WND的基础信息分离出大鼠WND基因，该基因被认为是导致人类威尔逊病的基因。