LECラットを用いたヒトWilson病 病因遺伝子のクローニング

利用 LEC 大鼠克隆人类威尔逊病致病基因

• 批准号: 05670151
• 负责人: 中林 啓記
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670151/
• 关键词: ウイルソン病; LECラット; 連鎖解析; RB遺伝子

LECラット病因遺伝子に連鎖する遺伝子を検討するために、まずヒトウイルソン病病因遺伝子が染色体13番の長腕14.3に位置し13q14.1-14.2のエステラーゼ(Es)Dや13q14.3の癌抑制遺伝子RBと連鎖することに着目した。LECラットの病因遺伝子もまた、ラットエステラーゼやRB遺伝子に連鎖している可能性が考えられることより、F344、PVGとLECラットとの戻し交配ラットを作製し検討を行った。ラットエステラーゼ18種のうち12種の遺伝子は19番染色体リンケージグループVに存在する。その代表例Es-1,2,10について検討したが、連鎖は見られなかった。残りのエステラーゼのうち、Es-6は8番染色体に存在するが、やはり連鎖は見られなかった。Es-12は染色体座位はわかっていないが、マウスエステラーゼ14との相同性からやはり8番染色体に存在する可能性があった。Es-12はF344との戻し交配ラットで組換え率27.8%で連鎖する可能性がのこされた。更に8番染色体にある3つのリンケージグループA,B,CについてPCRマーカー遺伝子を用いて検討した。Es-6の存在するリンケージグループBのTPMマーカーではやはり連鎖は見られず、またリンケージグループCに存在するPKATAマーカーでも連鎖は見られなかった。Es-12自身もTPMマーカー、PKATAマーカーとは連鎖が認められなかった。RB遺伝子との連鎖解析については、まずラットRBcDNAをPCR法を用いて単離し4432塩基の配列を決定した。ヒトのRBのゲノムの構造を参考にイントロン及び3′-非翻訳領域を中心にPCRを行い、多型を検索した。その結果3′-非翻訳領域に遺伝子マーカーとなりうる3ケ所の鎖長多型を見いだした。この多型を用いて戻し交配ラットを検索した結果、病因遺伝子とRB遺伝子との連鎖の可能性は、極めて少ないことがわかった。以上の結果より、LEC疾患遺伝子は、ヒトの染色体13q14.3領域と異なる遺伝子連鎖形式を有するものと考えられる。現在ヒトウイルソンの病責任遺伝子と考えられるWNDの塩基情報をもとにラットWND遺伝子の単離を試みている。

为了研究与LEC大鼠发病机理基因相关的基因，我们首先关注位于13、14.3染色体长臂上的人类威尔逊病发病机理基因，并与酯酶（ES）D与13q14.1-14.2的酯酶（ES）D相关，并从13Q14.3中抑制了肿瘤抑制基因RB。据认为，LEC大鼠的致病基因也可以与大鼠酯酶和RB基因有关，因此准备并研究了F344，PVG和LEC大鼠之间的大鼠。在18个大鼠酯酶中，在V染色体连接组中发现了12个基因。检查了ES-1、2和10的代表性示例，但未观察到连接。在其余的酯酶中，ES-6存在于8号染色体上，但没有再次观察到连接。尽管ES-12的染色体位点尚不清楚，但由于其与小鼠酯酶14的同源性，也可能发现它存在于8号染色体上。目前尚不清楚ES-12可以在F344的反向杂交大鼠中以27.8％的重组率连接。此外，使用PCR标记基因检查了第8染色体上的三个连接组A，B和C。在链接组B组的TPM标记中未观察到ES-6的TPM标记，并且在链接组C组的PKATA标记中未观察到C. ES-12本身并未显示与TPM标记或PKATA标记的链接。为了与RB基因的连锁分析，首先使用PCR分离大鼠Rb cDNA，以确定4432个碱基的序列。使用人RB基因组的结构，PCR主要是在内含子和3'-非翻译区域进行的，以寻找多态性。结果，在3'-非翻译区域中发现了可能是遗传标记的三个链长多态性。使用这种多态性搜索后跨大鼠表明，致病基因和RB基因之间的连锁可能性极小。基于上述结果，据信LEC疾病基因的遗传连锁格式与人类13q14.3区域不同。目前，我们试图根据WND的基本信息来隔离大鼠WND基因，这被认为是人类威尔逊疾病责任基因。