呼吸不全動物肺および培養肺胞上皮細胞による肺病変修復過程の分子生物学的検索

利用呼吸衰竭动物肺和培养肺泡上皮细胞对肺部病变修复过程进行分子生物学研究

基本信息

批准号：
04807112
负责人：
須加原一博
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

I.培養肺胞II型上皮細胞の増殖・分化と肺特異蛋白遺伝子の発現動態:II型細胞をラット肺より分離しEngelbreth-Holm-Swarm(EHS)上に培養し、インスリンやEGFなどの成長因子で刺激すると細胞のDNA合成が数十倍に増加し肉眼的にも確認できるほどの細胞塊を形成した。抗SP-A抗体でも強く染色されSP-A産生能を持つII型細胞増殖が確認された。細胞増殖に伴う肺表面活性物質アポ蛋白遺伝子の発現動態をノーザン・ブロット法により検索すると、SP-A mRNAとSP-C mRNAの減少およびSP-B mRNAの軽度増加がみられ、興味深いことにこの変化はin vitroで可逆的であった。現在、II型細胞の増殖を惹起するリポポリサッカライド(LPS)による呼吸不全動物を作製し、抗SP-A抗体によるII型細胞増殖を確認し肺表面活性物質アポ蛋白遺伝子発現動態を検索している。II.ストレプトゾトシン誘発糖尿病ラット肺における肺表面活性物質アポ蛋白SP-A,SP-BおよびSP-Cの遺伝子発現:糖尿病ラット肺では2型細胞と気道のクララ細胞が特異的に障害されサーファクタントの合成障害が起こる。SP-A蛋白の免疫染色での染色性低下、ELISA法によるSP-A蛋白測定での低下に反し、in situ hybridization法によるSP-A mRNAの発現検索では、予想に反して過剰発現していた。この過剰発現はノーザン・ブロット法による分析でも確認され、アポ蛋白遺伝子調節にフィードバック機構の存在が示唆された。SP-B mRNAもSP-Aと同様に過剰発現がみられたが、特にクララ細胞に強く発現していた。SP-C mRNAでは逆にコントロール群に比し発現の低下が観察され、気道粘膜上皮細胞には両群ともに発現がみられなかった。3つのアポ蛋白に遺伝子発現の差がみられ、糖尿病病態が3つのアポ蛋白遺伝子発現に関し何らかの制御異常を示しているものと思われた。III.培養肺胞II型上皮細胞によるDNA修復研究:DNA損傷は癌の発生と密接な関係があると考えられているが、紫外線による肺胞上皮細胞のDNA切断をin situ nick translation法により検討しDNA損傷の修復が確認された。

I. Proliferation and differentiation of cultured alveolar type II epithelial cells and expression kinetics of lung-specific protein genes: Type II cells were separated from rat lungs and cultured on Engelbreth-Holm-Swarm (EHS), and stimulated with growth factors such as insulin and EGF, the DNA synthesis of the cells increased several tens of times, resulting in cell masses that could be visually visible.抗SP-A抗体也染色，并确认具有SP-A生产能力的II型细胞的增殖。在通过北印迹细胞增殖后，搜索肺表面活性剂载脂蛋白基因的表达动力学显示SP-A和SP-C mRNA的降低以及SP-B mRNA的温和增加，这是有趣的是，这种变化在体外是可逆的。当前，使用脂多糖（LPS）产生呼吸衰竭动物，该动物诱导II型细胞的增殖，并正在研究以表达肺表面活性物质丙蛋白基因的表达。 ii。链霉菌素诱导的糖尿病大鼠肺中肺表面活性剂Apoproteins SP-A，SP-B和SP-C的基因表达：在糖尿病大鼠的肺中特异性受损，导致表面活性剂合成受损。与通过ELISA免疫染色的SP-A蛋白免疫染色以及SP-A蛋白测量的降低相反，使用原位杂交方法对SP-A mRNA的表达搜索与预期相反。北印迹分析也证实了这种过表达，这表明在调节载脂蛋白基因的调节中存在反馈机制。 SP-B mRNA也以与SP-A相同的方式过表达，但在克拉拉细胞中特别强烈表达。相反，与对照组相比，在SP-C mRNA中观察到表达降低，并且在气道粘膜上皮细胞中均未观察到两组的表达。三种载脂蛋白之间的基因表达有所不同，看来糖尿病病理表明三种载脂蛋白基因表达的调节异常。 iii。 DNA修复研究使用培养的II型上皮细胞的研究：DNA损伤被认为与癌症的发展密切相关，但是使用原位nick翻译方法研究了由于紫外线射线而导致的肺泡上皮细胞的DNA破裂，以确认修复DNA损伤。