RNAインターフェレンスを用いた分子標的筋再生療法の確立

利用RNA干扰建立分子靶向肌肉再生疗法

基本信息

批准号：
20650086
负责人：
松田修
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20650086/
关键词：
再生医学遺伝子発現制御

项目摘要

筋芽細胞の分化・増殖を抑制するサイトカインを標的とし、その発現をRNA干渉(RNAi)技術を用いて特異的に制御する分子標的療法を開発し、長期臥床高齢者のリハビリテーションのための全く新しい筋肉の再生医療につなげることを目標とする研究を行った。このサイトカインに特異的なshort inter fering RNA (siRNA)(siC)を数種合成し、マウス筋芽細胞株に導入したところ、同遺伝子の有意な発現低下が認められ、また筋芽細胞の増殖能が亢進することが、real time RT-PCRとテトラゾリウム塩アッセイにて示された。in vivoでのsiCの効果を検討するために、マウス骨格筋へのsiRNA導入法に改変を加え、効率の向上を行った技術を用い、siCをマウス骨格筋にin vivo導入し、経時的にマウスを安楽死させ、筋肥大の指標として筋の断面積を測定した。さらに筋の収縮能の変化を評価する目的で、一定の電気パルスを与えたときの筋の収縮力を計測した。その結果、siRNAを導入しなかったマウスの筋、および非特異的siRNAを同様の手法で導入したものに比して、siCを投与した群では有意に筋断面積が増加し、このサイトカインの特異的サイレンシングにてin vivoで筋肥大が誘導できることが分かった。また収縮力がコントロールと比べて有意に増強していたことから、肥大筋が収縮能でも強まっていることが示された。また、得られた筋細胞を培養し種々のアッセイで解析することにより、さらに上記の所見をコンファームする結果が得られている。本研究の成果は、廃用性萎縮筋の肥大と増強が、サイトカインを標的とするRNAi分子標的療法にて生体内で可能なことを初めて示したものであり、長期臥床高齢者のリハビリテーションと筋の再生医療に全く新しい地平を開く可能性があるものとして期待できる。

我们进行了研究，目的是靶向抑制成肌细胞分化和增殖的细胞因子，并使用RNA干扰（RNAI）技术专门控制其表达，从而导致全新的肌肉再生医学，以长期康复，以恢复卧床不起的老年人。合成了该细胞因子特异性的几个短干扰RNA（siRNA）（SIC）（SIC）并引入小鼠成肌细胞细胞系，并且基因的表达显着降低，实时RT-PCR和四唑盐测定法显示，肌细胞的增殖能力增加了。为了研究SIC在体内的作用，使用一种技术，将提高效率的技术引入小鼠骨骼肌中，将siRNA在体内将siRNA引入小鼠骨骼肌中，随着时间的流逝，对肌肉的横截面区域被测量作为肌肉肥大的指标。此外，为了评估肌肉收缩力的变化，测量应用恒定电脉冲时的肌肉收缩力。结果，发现与在siRNA和非特异性siRNA中未引入的肌肉相比，施用SIC的组肌肉横截面显着增加，并且使用相同的方法引入了肌肉，并且该细胞因子的特异性沉默可以在体内诱导肌肉肥大。此外，与对照组相比，收缩力显着增加，表明肥大性肌肉的收缩能力也增加了。此外，通过培养所获得的肌肉细胞并在各种测定中分析它们，进一步证实了上述发现的结果。这项研究的结果是第一个证明肥厚型和增强萎缩性萎缩性肌肉的方法可以在体内使用靶向细胞因子的RNAi分子靶向疗法来实现，并且可以预期，长期康复和肌肉再生药物的长期康复和肌肉再生药物在长期床上有长期床的恢复生活。

项目成果

期刊论文数量（3）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Enhanced expression of interleukin-6, matrix metalloproteinase-13, and receptor activator of NF-kappaB ligand in cells derived from osteoarthrtic subchondral bone

骨关节炎软骨下骨来源细胞中白细胞介素 6、基质金属蛋白酶 13 和 NF-κB 配体受体激活剂的表达增强

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
J Orthop Sci. 13(3)
影响因子：
0
作者：
Sakao K;et al.
通讯作者：
et al.

Comparison of anti-rheumatic effects of local RNAi-based therapy in collagen induced arthritis rats using various cytokine genes as molecular targets

DOI：
10.3109/s10165-008-0131-3
发表时间：
2009-04
期刊：
Modern Rheumatology
影响因子：
2.2
作者：
A. Inoue;Kenji A. Takahashi;O. Mazda;Y. Arai;M. Saito;T. Kishida;M. Shin-Ya;T. Morihara;H. Tonomura;K. Sakao;J. Imanishi;T. Kubo
通讯作者：
A. Inoue;Kenji A. Takahashi;O. Mazda;Y. Arai;M. Saito;T. Kishida;M. Shin-Ya;T. Morihara;H. Tonomura;K. Sakao;J. Imanishi;T. Kubo