RNAインターフェレンスを用いた分子標的筋再生療法の確立

利用RNA干扰建立分子靶向肌肉再生疗法

基本信息

批准号：
20650086
负责人：
松田修
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20650086/
关键词：
再生医学遺伝子発現制御

项目摘要

筋芽細胞の分化・増殖を抑制するサイトカインを標的とし、その発現をRNA干渉(RNAi)技術を用いて特異的に制御する分子標的療法を開発し、長期臥床高齢者のリハビリテーションのための全く新しい筋肉の再生医療につなげることを目標とする研究を行った。このサイトカインに特異的なshort inter fering RNA (siRNA)(siC)を数種合成し、マウス筋芽細胞株に導入したところ、同遺伝子の有意な発現低下が認められ、また筋芽細胞の増殖能が亢進することが、real time RT-PCRとテトラゾリウム塩アッセイにて示された。in vivoでのsiCの効果を検討するために、マウス骨格筋へのsiRNA導入法に改変を加え、効率の向上を行った技術を用い、siCをマウス骨格筋にin vivo導入し、経時的にマウスを安楽死させ、筋肥大の指標として筋の断面積を測定した。さらに筋の収縮能の変化を評価する目的で、一定の電気パルスを与えたときの筋の収縮力を計測した。その結果、siRNAを導入しなかったマウスの筋、および非特異的siRNAを同様の手法で導入したものに比して、siCを投与した群では有意に筋断面積が増加し、このサイトカインの特異的サイレンシングにてin vivoで筋肥大が誘導できることが分かった。また収縮力がコントロールと比べて有意に増強していたことから、肥大筋が収縮能でも強まっていることが示された。また、得られた筋細胞を培養し種々のアッセイで解析することにより、さらに上記の所見をコンファームする結果が得られている。本研究の成果は、廃用性萎縮筋の肥大と増強が、サイトカインを標的とするRNAi分子標的療法にて生体内で可能なことを初めて示したものであり、長期臥床高齢者のリハビリテーションと筋の再生医療に全く新しい地平を開く可能性があるものとして期待できる。

我们开发了一种分子靶向疗法，针对抑制成肌细胞分化和增殖的细胞因子，利用RNA干扰（RNAi）技术特异性控制其表达，为长期卧床的老年患者的康复创造一种全新的疗法我们进行研究的目的是实现肌肉再生医学。当我们合成了几种针对该细胞因子的短干扰RNA（siRNA）（siC）并将其导入小鼠成肌细胞系时，我们观察到该基因的表达显着下降，成肌细胞的增殖能力也显着降低实时 RT-PCR 和四唑盐测定可增强这一点。为了检查 siC 在体内的作用，我们使用一种通过修改将 siRNA 引入小鼠骨骼肌的方法来提高效率的技术将 siC 引入小鼠骨骼肌体内，并对小鼠进行安乐死并测量肌肉横截面积。作为肌肉肥大的指标。此外，为了评估肌肉收缩力的变化，我们测量了施加恒定电脉冲时的肌肉收缩力。结果，与未转染siRNA的小鼠和使用相同方法转染非特异性siRNA的小鼠的肌肉相比，siC施用组的肌肉横截面积显着增加，这表明这种细胞因子的特异性发现，通过沉默细胞可以在体内诱导肌肉肥大。此外，与对照相比，收缩力显着增加，表明肥大的肌肉也具有增强的收缩能力。此外，通过培养获得的肌肉细胞并使用各种测定对其进行分析，获得了进一步证实上述发现的结果。该研究结果首次证明，利用针对细胞因子的RNAi分子靶向治疗，可以在体内肥大和强化废弃的萎缩肌肉，对于长期卧床的老年人的康复和肌肉锻炼具有重要意义。预计这将为再生医学开辟一个全新的视野。

项目成果

期刊论文数量（3）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Enhanced expression of interleukin-6, matrix metalloproteinase-13, and receptor activator of NF-kappaB ligand in cells derived from osteoarthrtic subchondral bone

骨关节炎软骨下骨来源细胞中白细胞介素 6、基质金属蛋白酶 13 和 NF-κB 配体受体激活剂的表达增强

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
J Orthop Sci. 13(3)
影响因子：
0
作者：
Sakao K;et al.
通讯作者：
et al.

Comparison of anti-rheumatic effects of local RNAi-based therapy in collagen induced arthritis rats using various cytokine genes as molecular targets

DOI：
10.3109/s10165-008-0131-3
发表时间：
2009-04
期刊：
Modern Rheumatology
影响因子：
2.2
作者：
A. Inoue;Kenji A. Takahashi;O. Mazda;Y. Arai;M. Saito;T. Kishida;M. Shin-Ya;T. Morihara;H. Tonomura;K. Sakao;J. Imanishi;T. Kubo
通讯作者：
A. Inoue;Kenji A. Takahashi;O. Mazda;Y. Arai;M. Saito;T. Kishida;M. Shin-Ya;T. Morihara;H. Tonomura;K. Sakao;J. Imanishi;T. Kubo