Akt及びOct4の機能発現調節系の重複検索による体細胞初期化因子の同定

通过重叠搜索 Akt 和 Oct4 功能表达调控系统鉴定体细胞重编程因子

基本信息

  • 批准号:
    19658102
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.18万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 财政年份:
    2007
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2007 至 2008
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

マウスを用いてOct4上流カスケードとAkt下流カスケードを解析し、体細胞初期化のメカニズム及び体細胞初期化因子の同定とそれらの成果を踏まえて体細胞初期化能の高いブタ卵子の生産を目的に実験を行い、更に体細胞初期化についても研究を継続し次の成果を得た。マウスの成果を踏まえブタ卵子の体細胞初期化能誘起条件を解析した。カフェインが卵子のMPF(p34cdc2 kinase)活性を高め、核膜崩壊及び早期染色体凝集誘起を促進した。また、カフェインの感作時間も重要で3時間添加が体細胞初期化能を高めるとともに前核形成も抑制した。体外成熟40時間で正常紡錘体形成誘起能・体細胞初期化能の高い卵子が生産されることを明らかにした。さらに体細胞初期化能の高い卵子をサイトカラシンDで処理し、イオノマイシン・シクロヘキシミドで活性化させるとアクチンフィラメントが正常に配置されること、また正常に配置する卵子の比率も高まることを明らかにした。以上のようにして準備した体外成熟家畜ブタ卵子をレシピエントとしてミニブタ体細胞クローン個体生産に成功した。これに付随して体細胞クローン胚を発育させる仮親の条件も検討し、単為発生胚との共移植が良好な結果をもたらすことを明らかにした。マウスにおいて未分化生殖腺細胞から分泌される成長因子がES細胞を始原生殖細胞に誘導することを明らかにした。また、ラットにおいて桑実期胚からES様細胞誘導に顕著な効果を示すフィーダー細胞を同定し、初期化因子同定の新たな素材を得た。成熟マウス卵子生産にNOが有効であることを明らかにした。Thr308-及びSer473-リン酸化Aktが減数分裂完了・体細胞初期化に関与することを明確に示した。以上、マウス、ブタにおいて体細胞初期化能発現に関わる調節因子の同定に成功し、家畜ブタ卵子を用いてミニブタ体細胞クローン作製につなげることができた。
使用小鼠分析了Oct4和下游AKT级联反应的上游级联反应,并基于体细胞重编程和体细胞重编程因子的鉴定的机制,并进行了这些实验的结果,以产生具有较高能力的猪鸡蛋,具有较高的重新编程体细胞重编程。此外,继续对体细胞重编程进行研究,并获得以下结果。根据小鼠的结果,分析了诱导猪卵的体细胞重编程能力的条件。咖啡因在卵中增强​​的MPF(P34CDC2激酶)活性,促进核破坏和诱导早期染色体聚集。此外,咖啡因敏化的时间也很重要,增加3小时的时间增加了回忆体细胞并抑制形成原核的能力。据表明,可以在40小时的体外成熟时产生高能力诱导正常纺锤体形成和再现体细胞的卵。此外,揭示了用细胞链霉素D处理高细胞重编程能力的卵,并用离子霉素环己酰亚胺激活它们,将导致正常放置肌动蛋白丝的放置,并且卵的比例正常增加。使用如上所述制备的体外成熟的家猪卵,我们成功地产生了一个迷你孢子体细胞克隆个体。结合使用,我们还检查了发展躯体克隆的胚胎的伪父母的条件,并发现与孤发剂胚胎的共同转移产生了良好的效果。发现从未分化的性腺细胞分泌的生长因子会诱导ES细胞为小鼠原始生殖细胞。此外,还鉴定出对大鼠莫鲁利期胚胎的ES样细胞诱导具有显着作用的馈线细胞,并获得了鉴定可再现因子的新材料。据揭示,NO在成熟小鼠的卵产生中有效。清楚地表明,THR308和SER473磷酸化AKT参与减数分裂的完成和体细胞重编程。因此,鉴定小鼠和猪中体细胞重编程能力表达涉及的调节因素是成功的,并且可以使用家养猪卵生产微型孢子体细胞克隆。

项目成果

期刊论文数量(9)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Cellular and molecular events during oocyte maturation
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In vitro induction of potential primordial germ cells from mouse embryonic stem cells by culture with undifferentiated gonadal cells
通过与未分化性腺细胞培养体外诱导小鼠胚胎干细胞潜在的原始生殖细胞
  • DOI:
  • 发表时间:
    2008
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Tomioka;I.;Honma;Y.;Sasada;H.;Sato;E.
  • 通讯作者:
    E.
Influence of hyaluronan accumulation during cumulus Expansion on in vitro Dorcine oocyte maturation
卵丘扩张过程中透明质酸积累对体外猪卵母细胞成熟的影响
  • DOI:
  • 发表时间:
    2009
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Hirayama T. Ogura G;Milkai H;Otaishi N.;平山琢二;横尾正樹・佐藤英明
  • 通讯作者:
    横尾正樹・佐藤英明
畜産学の視点、畜産学の立脚点を考える
对畜牧业视角和畜牧业起点的思考
  • DOI:
  • 发表时间:
    2009
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Hirayama T. Ogura G;Milkai H;Otaishi N.;平山琢二;横尾正樹・佐藤英明;佐藤英明;佐藤英明;佐藤英明;佐藤英明;佐藤英明;佐藤英明;佐藤英明;佐藤英明
  • 通讯作者:
    佐藤英明
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Akt 在小鼠卵母细胞减数分裂的完成中发挥作用。
  • DOI:
  • 发表时间:
    2008
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Hirayama T. Ogura G;Milkai H;Otaishi N.;平山琢二;横尾正樹・佐藤英明;佐藤英明;佐藤英明;佐藤英明;佐藤英明;佐藤英明;佐藤英明;佐藤英明
  • 通讯作者:
    佐藤英明
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